论文部分内容阅读
目的：研究人羊膜间充质干细胞(human amniotic membrane mesenchymal stem cells, hAMSCs)移植对大鼠类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的治疗作用及抗炎作用机制,为其临床应用提供依据。方法：足跖部皮下注射完全佐剂诱导大鼠RA模型,培养第3-4代hAMSCs经舌下静脉注射移植,观察大鼠一般情况；容积法观测关节肿胀程度；x线检查关节影像学变化；HE染色后进行关节组织病理学检查；免疫组织化学法检测关节组织蛋白(oseteoprotegerin,OPG)表达；荧光显微镜下观察CY3标记MAB1281阳性hAMSCs在关节组织中的定植；检测外周血常规；ELISA法检测炎性因子与抗炎因子。结果：hAMSCs组治疗RA大鼠一般情况良好,体重与正常组无差异(P>0.05)；随治疗时间的推移hAMSCs组能明显减轻关节肿胀程度,且明显低于模型组(P<0.05)：大鼠关节影像学检查显示,模型组大鼠左侧关节周围软组织肿胀明显,关节腔结构模糊难辨,并有明显关节畸形、软骨与骨质破坏；阳性药甲氨喋呤(methotrexate, MTX)组关节周围软组织肿胀较模型组好转,仍可见较轻的软骨及骨破坏；hAMSCs组大鼠关节腔清晰、完整,似正常组；组织病理学检查显示,模型组大鼠关节结构紊乱,关节腔可见大量炎性细胞浸润,滑膜细胞增生明显,较多纤维素样物质沉积,关节腔狭窄,伴有血管翳生成并侵及关节软骨,软骨和骨组织破坏明显；MTX组关节炎症明显减轻,炎性细胞较少,滑膜组织增生及血管翳生成减少,但仍有血管翳侵及软骨组织,存在一定的软骨损坏；而hAMSCs组关节结构清晰、较完整,炎症细胞极少,关节面光洁、层次清晰、完整,关节损伤评分显示,hAMSCs组与正常组一样,关节损伤评分明显低于模型组、MTX组,而MTX组关又明显低于模型组(P<0.05)；hAMSCs移植组关节软骨中OPG阳性表达率明显增高；外周血常规结果显示,治疗2-3w后依次出现Wbc、Rbc、Hb及Plt不同程度的降低,明显低于其他三组(P<0.05),hAMSCs移植组与正常组相似,对RA大鼠外周血常规无明显影响。荧光显微镜下可见,受损关节处可见到Cy3标记MAB1281阳性的hAMSCs定植于受损关节组织。且模型组大鼠左后足趾关节液及血清中IL-1p、IL-6、IL-17、TNF-α、 IFN-γ含量均明显高于正常组(P<0.05),hAMSCs组及MTX组则明显较模型组降低(P<0.05),而模型组大鼠左后足趾关节关节液及血清中明显低于正常组(P<0.05),hAMSCs组和MTX组治疗后,IL-1p、IL-6、IL-17、TNF-α、 IFN-γ含量明显较模型组降低,而IL-4、IL-10、TGF-p含量明显升高。结论：hAMSCs移植对RA大鼠具有明显治疗作用,不但可减轻炎症损伤,还能建设软骨与骨破坏,hAMSCs的作用机制可能与下调炎症因子,上调抗炎因子和OPG有关。