本研究通过基因工程技术,将纳米抗体和PE38毒素天然耦合起来,构建了一种可以特异性杀伤HER2阳性乳腺癌细胞的免疫毒素。将HER2作为抗原对羊驼进行免疫,然后提取羊驼血液中的抗体构建噬菌体文库。通过噬菌体文库筛选出23个HER2阳性抗体。接着通过ELISA抗体抗原结合检测筛选出10个亲和力最好的纳米抗体,经序列分析,其中包含4个不同的纳米抗体。选取HER2亲和力最好的1个纳米抗体构建到pc DNA3.1质粒载体中,通过大肠杆菌TOP10高效表达系统进行纳米抗体蛋白的表达。使用Protein A蛋白纯化柱进行分离纯化并对纯化后的抗体蛋白进行抗体抗原结合检测和Western Blot分析,结果证明纳米抗体蛋白被成功纯化。其与HER2蛋白亲和常数KD为7.2×10-6M。将纳米抗体蛋白序列与PE38毒素序列耦合起来并导入p ET-30a质粒载体中,通过大肠杆菌BL21高效表达系统进行表达。经过镍柱分离纯化得到免疫毒素,并进行细胞杀伤实验。最终得到1个对HER2阳性细胞具有良好特异性杀伤效果的免疫毒素,针对SKBR3细胞的IC50值为851.5p M。本研究成功筛选出针对HER2特异性良好的纳米抗体序列;成功构建了p CDNA3.1-TOP10以及p ET-30a-BL21表达系统;最终筛选出对HER2阳性细胞具有良好特异性杀伤效果的免疫毒素。本研究为HER2阳性乳腺癌的特异性靶向治疗提供了新的研究思路,具有良好的应用前景并且迄今为止还没有任何针对HER2的免疫毒素上市,因此本研究中的免疫毒素将来一旦在临床治疗当中取得成功,将为HER2阳性乳腺癌防治填补一项空白。