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目的:(1)明确小鼠经过肾脏缺血再灌注损伤手术后,肾功能指标及肾组织中MALAT1的表达变化;(2)体外培养人近曲小管上皮细胞HK2,并通过转染人近曲肾小管上皮细胞针对MALAT1的siRNA,利用氯化钴Cocl2处理化学模拟缺氧,初步明确MALAT1对细胞缺氧中的炎症反应的作用及可能调控机制。方法:(1)利用微型动脉夹夹闭C57小鼠双侧肾蒂40分钟后,恢复血流灌注,构建小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型。小鼠分组如下:假手术组(sham组)、再灌注6h组(IR6h组)、再灌注12h组(IR12h组)。术后收集血清,检测血肌酐Scr及尿素氮BUN等肾功能指标,明确肾功能损伤程度;收集肾脏组织,进行HE染色,明确肾脏病理损伤程度;提取肾脏组织RNA,利用实时定量PCR检测肾脏组织中MALAT1的表达。(2)体外培养人近曲肾小管上皮细胞(HK2),由生物公司构建siRNA(siMALAT1)和对照组siRNA(siNegatvie control即siNC),通过脂质体转染法转染入HK2细胞,给予氯化钴Cocl2(200umol/L)处理进行化学模拟缺氧。细胞分组如下:空白对照组、Cocl2处理组、siNC组、siMALAT1组、siNC+Cocl2组及siMALAT1+Cocl2组。处理后提取细胞的RNA及蛋白质。通过RT-PCR检测MALAT1水平,明确细胞水平Cocl2处理后MALAT1的表达及siMALAT1对MALAT1的下调程度;通过蛋白免疫印记Western blot检测HIF-1ɑ及NF-κB的蛋白表达;通过酶联免疫吸附实验ELISA检测细胞培养上清中炎性因子(TNF-ɑ、IL-6)的表达。结果:(1)动物实验:a.损伤组IR6h的血肌酐Scr及尿素氮BUN明显高于假手术组(p<0.05);b.损伤组IR12h组的血肌酐Scr及尿素氮BUN明显高于假手术组(p<0.05);且再灌注12h组的损伤相对于再灌注6h组更为严重(p<0.05);c.肾组织RT-PCR检测结果显示IR6h及IR12h组肾组织中MALAT1的表达明显高于假手术组(p<0.05);且IR12h组MALAT1较IR6h组表达亦明显增加(p<0.05),且其表达变化与肾功能指标(血肌酐Scr及尿素氮BUN)的变化保存一致。(2)细胞实验:RT-PCR检测结果显示:(1)siMALAT1组与siNC组相比,MALAT1表达明显降低(p<0.05)。(2)给予Cocl2化学模拟缺氧后,与空白对照组相比,Cocl2处理组MALAT1表达明显增加(p<0.05);(3)与siNC组相比,siMALAT1组的HIF-1ɑ、NF-kB蛋白表达及IL-6、TNF-ɑ的表达均明显增加(p<0.05);(4)与siNC+Cocl2组相比,siMALAT1+Cocl2组的HIF-1ɑ、NF-kB蛋白表达及IL-6、TNF-ɑ的表达明显增加(p<0.05)。结论:(1)小鼠肾脏缺血再灌注损伤后,血肌酐Scr及尿素氮BUN明显升高,同时伴有肾组织MALAT1的表达增加,与肾功能损伤程度保持一致;(2)HK2细胞经siRNA转染及Cocl2缺氧处理后,可发现缺氧情况下,siMALAT1可能通过明显增加HIF-1ɑ及NF-kB的蛋白表达,而促进细胞缺氧损伤中的炎症反应,即增加炎性因子TNF-ɑ、IL-6的表达。