Pirin蛋白属于功能多样的Cupin家族,是一种在真核生物和原核生物中广泛表达、高度保守的金属核蛋白。作为转录调节因子,Pirin同源蛋白参与了细胞调节的许多过程,但其确切的生物学功能不明。最近文献报道Pirin在癌细胞如黑色素瘤中高度表达,且蛋白的表达差异与不同类型的恶性肿瘤密切相关。然而,迄今尚缺乏Pirin蛋白在相关组织细胞中的分布和含量的数据,因此,建立一种能快速鉴定和准确定量生物样品中Pirin同源蛋白的分析方法显得十分重要。相比传统的比色、放射示踪、酶联免疫、抗体印迹等定量方法,多反应监测质谱法（MRM-MS）以其高灵敏度、高选择性、可多通道准确定量的特点,在复杂生物基质的低含量样品分析中展现出了特殊优势。本文以课题组成功表达并解析出晶体结构的两种具有槲皮素酶活性的Pirin同源蛋白（人体h Pirin和大肠杆菌Yhh W）为研究对象,筛选出了各自的特征肽段,建立了质谱多反应监测鉴定及定量方法,并将其运用于多种生物样品（菌株、肝细胞、组织、黑色素瘤细胞）中h Pirin和Yhh W的鉴定及定量。主要完成以下三个方面的工作:（1）基于特征肽的MRM-MS法测定不同菌株Yhh W的表达量。在大肠杆菌中表达Yhh W蛋白,用胰蛋白酶处理,质谱鉴定酶解产物,结合Blast分析筛选出Yhh W的特征肽,建立专一鉴定及准确定量Yhh W的液相色谱-质谱方法（定量限达fmol级、RSD小于13%、准确度97%-107%）,并将其用于不同类菌株中Yhh W绝对含量的测定。（2）二甲基衍生化MRM-MS法鉴别肝细胞中的h Pirin。在大肠杆菌中异源表达h Pirin蛋白,用胰蛋白酶酶切,通过Blast分析筛选出h Pirin的特征肽;用甲醛和氰基硼氢化钠对h Pirin酶切产物进行二甲基化衍生和同位素标记,可同时改善色谱保留时间和质谱离子化效率,从而建立专一鉴定和准确定量h Pirin的高灵敏度分析方法（灵敏度提高约5倍）,并将其运用于鉴定肝细胞中的h Pirin。（3）比较了不同生物样品中Pirin蛋白的表达差异。对不同物种的Pirin同源蛋白进行了序列比较,分析查找相同肽段,鉴定了Pirin蛋白在猪肉中的组织分布差异;测定了黑色素瘤细胞在不同浓度黄酮类化合物的培养条件下h Pirin的表达差异,发现花旗松素和芹菜素可以抑制A375黑色素瘤细胞增殖,同时引起Pirin的表达呈现差异。