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microRNA (miRNA)是一类内源性的小片段非编码RNA,参与基因的转录后调控,影响了昆虫生长发育及免疫防御的许多过程。小菜蛾是危害十字花科植物的重要害虫,其与寄主植物的相互作用是否受到miRNA的调控,目前仍不清楚。本研究通过开展小菜蛾唾液腺中小RNA (sRNA)的测序,利用生物信息学方法预测miRNA及其靶基因,筛选可能与寄主植物中硫代葡萄糖苷生物合成途径基因互作的miRNA,并对其在小菜蛾中的靶基因进行验证。我们发现小菜蛾唾液腺sRNA的长度主要分布在22-26 nt,预测其中包含774条保守的miRNA,545条新miRNA,并在此基础上构建了miRNA表达谱。这些miRNA在小菜蛾基因组中可能的靶基因共有47,822个。GO聚类分析表明,其分子功能主要集中在催化活性和分子互作两大类,参与了细胞过程、代谢过程,以及一些刺激应答、信号途径等生物过程。KEGG分析发现,其参与了包括代谢通路、蛋白消化和吸收以及分泌相关的通路。挑选小菜蛾中5个经预测能靶定在拟南芥硫代葡萄糖苷合成途径基因上的miRNA,通过T-A克隆、测序和序列比对,确认miR-306a-5p在昆虫中保守存在,而可能在寄主植物中存在同源序列。根据小菜蛾基因的编码区和非编码区序列,分别预测miR-306a-5p可能的靶基因,并对其中8个开展实验验证。不同发育阶段表达模式分析发现,miR-306a-5p与预测靶基因Px013190、Px010939、Px001479、Px000505和Px014036有相反的表达模式。miR-306a-5p在3龄幼虫和蛹期表达相对较高,而预测靶基因则正相反。在小菜蛾细胞中进行miR-306a-5p模拟物和抑制剂的转染,发现预测靶基因Px013190、Px001479、Px000505和Px014036的表达在miRNA过表达时被抑制,而在抑制处理实验中未发现有明显上调趋势的预测靶基因。对miRNA过表达以及抑制处理的细胞进行转录组测序和分析,发现在两组处理组中具有相反趋势的差异表达基因为Px003058和Px006077,但并非之前预测的靶基因。本研究将为探索miRNA在昆虫与植物间的跨界作用、探明其在小菜蛾适应寄主植物过程中的作用奠定基础,也将为利用miRNA从分子水平防治小菜蛾提供理论依据。