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目的观察阳离子脂质体法转染增强型绿色荧光蛋白的效果,探讨NSCs作为基因靶细胞和EGFP示踪的可行性;探讨阳离子脂质体转染对糖尿病大鼠视网膜下移植NSCs的影响;探讨神经干细胞糖尿病大鼠视网膜下移植后发生炎性反应的可能性。方法用链尿佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射制作大鼠糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)模型?于模型建立后4周、8周及12周处死大鼠,取眼球做石蜡切片及视网膜铺片?用免疫组化法检测TLR4(toll receiptor 4)、转化因子NF-кB及VEGF在视网膜的表达?用胰酶消化视网膜并行PAS视网膜血管染色,观察管视网膜血管形态变化?从孕12 d的Wistar大鼠胚胎脑泡培养神经干细胞,无血清培养,免疫组织化学技术鉴定。将报告基因pEGFP-N1经Lipofectamine介导转染神经干细胞(EGFP组)观察EGFP表达,以同期培养未转染的细胞作为对照组,测定细胞活力、生长曲线和转染效率。在一组实验(A实验)中,将报告基因pEGFP-N1经Lipofectamine介导转染神经干细胞(EGFP组),以同期培养未转染的细胞作为对照组,将两组神经干细胞分别行糖尿病大鼠视网膜下移植,rt-PCR、明胶酶谱法检测TOLL受体4(TLR4)、核因子NF-κBmRNA、蛋白质的表达。试验分3组:NSCs移植组(A组),DMEM填充组(B组)和非手术对照组(C组)。在另一组实验(B实验)中,大鼠糖尿病成模后,A组视网膜下移植大鼠胚胎神经干细胞,B组视网膜下填充DMEM,C组不做手术处理。western-blot检测核因子NF-κB的蛋白表达。结果糖尿病大鼠成模后视网膜VEGF的表达持续上调,而视网膜血管自4周出现周细胞的病理改变,8周有微血管瘤形成,12周可见无细胞血管?体外培养出大鼠胚胎神经干细胞。荧光显微镜观察到被转染的神经干细胞长期表达绿色荧光蛋白,两组细胞具有相似的形态学变化和生长曲线,流式细胞仪结果显示转染率最高可达到35.2%。在A实验中,两组细胞分别行糖尿病大鼠视网膜下移植,TLR4,NF-κB mRNA,蛋白质的表达无显著性差异。在B实验中,糖尿病大鼠视网膜下移植大鼠胚胎神经干细胞后,A组大鼠NF-κB持续表达阳性,B组仅术后1周NF-κB阳性表达,C组NF-κB表达为阴性。各组NF-κB表达有显著性差异。结论链尿佐菌素腹腔注射制作大鼠糖尿病视网膜病变模型成功?成模4周已有病理性改变。大鼠胚胎神经干细胞能够在体外适宜的条件下长期培养;转染EGFP对胚胎神经干细胞的体外增殖无明显的影响;阳离子脂质体Lipofectamine介导转染神经干细胞效率较高,报告基因表达时间长,不影响糖尿病大鼠神经干细胞视网膜下移植,为做标记细胞移植研究及糖尿病视网膜病变的神经干细胞治疗研究奠定基础。糖尿病大鼠NSCs视网膜下移植后NF-κB持续表达阳性,提示术后有严重的炎性反应,或NSCs诱发了免疫反应。