论文部分内容阅读
朊病毒病(又称传染性海绵状脑病)的病原是致病型朊蛋白，在牛脑中聚集能够造成牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy，BSE)。患病牛脑中致病型朊蛋白的检测是诊断BSE的重要方法，其中免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)方法是检测的金标准。 为了寻找应用于IHC检测的抗中国黄牛PrP~c成熟蛋白的单克隆杂交瘤细胞，制备出抗中国黄牛PrP~c成熟蛋白的单克隆杂交瘤细胞系4C11，常规法制备脑组织石蜡切片，脱蜡、PK消化、水化高压、单抗孵育，最后用ABC试剂盒显色．结果显示单克隆抗体4C11和国际上常用的6H4和F89/160.1.5等单克隆抗体在BSE阳性切片的IHC染色结果上没有显著差异，因此单克隆抗体4C11可以替代国外昂贵的单抗，作为我国BSE检测的主要试剂。 应用IHC方法检测我国山东省150例牛脑样品。将固定好的脑组织样品按常规法制备脑组织石蜡切片，脱蜡后，用蛋白酶K消化酶解正常的PrP蛋白，水化高压，然后用自制的抗PrP单克隆抗体杂交瘤4C11腹水孵育切片(1：12000)，ABC法显色处理。同时结合H·E染色法检测我国BSE。实验结果表明，在山东省150例国内样品中IHC的检测结果均为阴性，H·E染色切片中均未发现有特征性海绵状空泡变化。IHC方法是一种操作简单、结果容易判断、价格低廉的检测手段，它比较适合于我国BSE的检测。 利用IHC染色方法，研究PrP~c在中枢神经组织的定位和分布。分别取大脑、小脑、间脑、前丘、后丘、脑桥、中脚、后脚、延脑、松果体等十个中枢神经系统的组织块，常规法石蜡切片，脱蜡后，水化高压，用自制的抗PrP单克隆抗体杂交瘤4C11腹水孵育切片(1：12000)，ABC法检测试剂盒显色处理．实验结果发现，PrP~c IHC染色较深区域有大脑中的分子层和多形细胞层、小脑中的分子层、后丘中的神经纤维网、中脚中的神经原胞体(核周体)、后脚中的神经原胞体、延脑中神经原胞体、松果体中的神经原和松果体细胞；PrP~c IHC染色比较弱的区域有小脑的蒲肯野氏细胞层和颗粒层、脑桥中的神经原和神经纤维网、后脚的神经纤维网和神经纤维束、延脑中的神中文摘要经原胞体;而在间脑中的神经原胞体和神经纤维网、前丘中的神经原胞体和神经纤维网、后丘中的神经纤维束、中脚的神经纤维网等处PrP阴性肴染.IHC染色结果还显示，PrPc的分布形式和PrPsc有很大差别. 我国虽然还未发现牛海纬状脑病，但是从目前的分析来看还存在一定的危险，因此，在我国建立牛海纬状脑病的基本的检测方法和进行相关的研究是十分必要和迫切的.