论文部分内容阅读
目的：MicroRNAs (miRNAs,微小RNA)是一类具有调控功能的RNA,已经被发现在多种恶性肿瘤组织中异常表达。研究发现在肾透明细胞癌(简称肾癌,renal cell carcinoma, RCC)中miR-134呈低表达,但其在肾癌中的作用和调控机制不明。本课题旨在研究miR-134在肾癌组织中的表达情况,探索miR-134在肾癌发生、发展中可能的调控机制。材料和方法：采用TaqMan实时荧光定量PCR (RT-PCR)方法检测4株肾癌细胞株以及24对肾癌组织和癌旁无瘤组织样本中miR-134的表达水平。运用流式细胞检测(周期和凋亡)、迁移实验、侵袭实验检测评估miR-134变化对肾癌细胞系786-0和caki-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验确定miR-134是否通过KRAS (Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog)的3’-UTR区域直接调控KRAS。miR-134模拟物转染肾癌细胞后,Western Blot检测和分析KRAS.增殖相关蛋白以及与肿瘤转移相关的上皮间质转化过程(epithelial-mesenchymal transition, EMT)表型蛋白的变化。结果：与癌旁无瘤组织相比,miR-134在肾癌组织中的表达水平显著下调(P<0.05)：与正常肾小管上皮细胞相比,4个肾癌细胞系(786-0. caki-1、769-P、 ACHN)中miR-134呈低表达(P<0.05)。体外实验中上调miR-134的表达水平可以使肾癌细胞G0/G1期阻滞(P<0.05),显著降低肾癌细胞的增殖能力(P<0.05)；过表达的miR-134还可以通过抑制EMT降低肾癌细胞迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.05)的能力。双荧光素酶报告实验证明KRAS为miR-134直接调控的靶基因。转染miR-134mimics后,细胞内KRAS蛋白表达水平显著降低,并且伴随着KRAS相关MAPK/ERK通路的激活以及EMT表型标志蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)水平降低(P<0.05)及N钙黏蛋白(N-cadherin)水平的升高(P<0.05)。结论：在肾癌中,miR-134可作为一种抑瘤因子,可能通过靶向调控KRAS的表达抑制肾癌细胞的增殖和上皮间质转化过程。目的：近年来大规模的基因组和转录组分析已经发现了大量的转录本,这其中就包括长链非编码RNA (long non-coding RNA, lncRNA), lncRNA被发现在各种疾病尤其是癌症中表达异常。然而,在肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)中是否具有特异性异常表达的lncRNA尚不明确。因此,我们选取了5名肾癌患者的样本,包括肿瘤组织(T)及其配对的癌旁无瘤组织(N),通过高通量基因芯片分析来研究肾癌中lncRNA的表达谱。材料和方法：我们利用带有33045个lncRNA和30215个mRNA的探针的高通量基因芯片对5名肾细胞癌患者的样本进行检测分析,筛选差异表达的lncRNA和mRNA。随后,我们又根据芯片结果选取了两个lncRNA (AK096725和ENST00000453068)在70名肾细胞癌患者的样本中进行了验证,利用定量反转录聚合酶连锁反应(RT-PCR)检测AK096725和ENST00000453068的表达水平。结果：LncRNA芯片在肾细胞癌组织中检测到了27279个lncRNA有效信号,与癌旁无瘤组织相比其中有480个lncRNAs表达上调(P<0.05；T/N>1.5),417个lncRNAs表达下调(P<0.05；N/T>1.5)。另外,19995个mRNA有效信号被探针检测到,其中458个mRNAs在肾细胞癌样本中表达升高(P<0.05；T/N>1.5),413个表达降低(P<0.05; N/T>1.5)。RT-PCR验证显示AK096725(P=0.043)和ENST00000453068(P＜0.001)在70对样本中表达水平的改变与基因芯片结果一致。结论：本课题利用5对肾细胞癌患者的组织样本,揭示了肾细胞癌中lncRNA的表达谱,同时鉴定出了在肿瘤组织中的异常表达lncRNA和mRNA。在后期验证试验中,我们发现AK096725的表达水平与肾细胞癌病理类型之间存在一定的相关性,这一发现值得关注。本研究结果可能对于寻找肾细胞癌新的生物学标志物有所帮助。