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目的:本专题以莪术油为参照,研究莪术、三棱药对中的挥发油(简称莪棱油),主要从以下三个方面:首先,通过正交试验,优化莪术、三棱药对中挥发油提取工艺;其次,以HepA肝癌荷瘤小鼠的瘤重抑制率和生命延长率为指标,研究莪术、三棱药对中挥发油药理作用;最后,运用薄层色谱法和气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术,对莪术、三棱药对中挥发油的成分进行分析。
方法:采用L9(34)正交实验,以粉碎度、加水量倍数和提取时间为三因素以及各自相对应三个水平,按《中国药典》(2005版一部)附录XD挥发油测定法进行莪棱油提取工艺的优化实验,确定最佳提取工艺,并以此为提取条件进行莪术油和莪棱油的提取;抽取HepA肝癌荷瘤小鼠的腹水接种于健康小鼠的右前肢腋窝皮下,作为实体瘤模型小鼠,另外,将HepA肝癌荷瘤小鼠的腹水注射于健康小鼠的腹腔,作为腹水型肿瘤模型小鼠,分别将两种模型小鼠分成阴性对照组(空白组)、阳性对照组(环磷酰胺)、莪术油治疗组和莪棱油治疗组四个组,对实体瘤模型小鼠的四个组以瘤重抑制率为指标,对腹水型肿瘤模型小鼠的四个组以生命延长率为指标,最终用SPSS12.0统计软件分析,对莪棱油的药理作用进行评价;建立薄层色谱条件,比较莪术油和莪棱油在薄层上的斑点数量和大小,运用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术,得到莪术油标准品、莪术油和莪棱油的色谱图,以色谱峰的保留时间(min)进行定性分析,以色谱峰的峰面积(百分比%)进行定量分析,并用Nist98标准质谱图库指认化合物。
结果:通过L9(34)正交试验,确定最佳提取工艺为莪术、三棱粗粉、8倍量水、提取时间6小时;实体瘤模型小鼠的阳性对照组(环磷酰胺)、莪术油治疗组和莪棱油治疗组的瘤重抑制率分别为73.70%、55.90%、57.62%,腹水型肿瘤模型小鼠的阳性对照组(环磷酰胺)、莪术油治疗组和莪棱油治疗组的生命延长率分别为197.8%、94.6%、121.7%,无论是实体瘤模型小鼠还是腹水型肿瘤模型小鼠,阳性对照组与阴性对照组,莪术油治疗组和莪棱油治疗组与阴性对照组,均有显著性差异;在化学成分方面,薄层色谱法比较,莪术油与莪棱油有细微的差异。气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术表明,莪术油的色谱图有58个峰,与莪术油标准品的色谱图比较,专属峰有12个,与莪棱油的色谱图比较,专属峰有2个,莪术油标准品的色谱图有55个峰,与莪术油的色谱图比较,专属峰有9个,莪棱油的色谱图有61个峰,与莪术油的色谱图比较,专属峰有5个,并从质谱图库中指认11个化合物。
结论:所得挥发油含量较文献报道略低[1-2],可能与药材的炮制方法有关。莪术油和莪棱油的瘤重抑制率均大于30%,腹腔给药生命延长率大于75%,并经统计学处理与阴性对照组有显著差异,由此认为莪术油和莪棱油有一定疗效;莪术油与莪术油标准品无论是定性分析中专属峰,还是定量分析中峰面积都有明显的差异,从而证实了两种莪术油不是来源于同种莪术。莪术油与莪棱油除了定性分析中少数专属峰消失或者生成外,定量分析中的百分比图大体相似,说明三棱对莪术油成分变化的影响不大。