目的:1.急性毒性试验:观察小鼠在24小时内2次给予葛黄解酒颗粒(Ge Huang Antialcoholism Granules,GHAG)后一定时间内所产生的毒性反应,初步阐明葛黄解酒颗粒的毒性作用及了解其毒性靶器官。2.长期毒性试验:通过长期反复给予大鼠葛黄解酒颗粒,预测葛黄解酒颗粒可能引起的临床不良反应;判断葛黄解酒颗粒长期反复给药的毒性靶器官或靶组织;推测后续临床试验的起始剂量,为临床试验提供安全剂量参考范围;为临床不良反应监测及防治提供参考。方法:1.急性毒性试验:昆明种小鼠40只,雌雄各半,按体重随机分为2组:空白对照组、给药组,每组20只。给药组以葛黄解酒颗粒最大浓度(1ml流浸膏约相当于2.4g原生药)和最大容积(0.4ml/10g B.W)2次灌胃动物(间隔6小时),对照组给予等容积的蒸馏水。给药后连续观察14天,记录所有出现的症状以及症状的起始时间、严重程度、持续时间、体重变化、死亡情况等。对濒死及死亡动物及时进行大体解剖观察,其余动物在观察期结束后进行大体解剖观察,当有肉眼可见病变时,则进行相应的组织病理学检查,观察期间每日称体重1次。2.长期毒性试验:葛黄解酒颗粒大鼠长期毒性试验设低、中、高3个剂量组和1个对照组,每组大鼠40只(给药90天10只,给药180天20只,停药28天10只)。葛黄解酒颗粒3个剂量组剂量分别为11.97、23.94、47.88 g(原生药)/kg?d(分别相当于临床每日推荐剂量的12.75、25.50、51.00倍),采用经口(灌胃)方法,单次给药容积1ml/100g·bw。对照组和葛黄解酒颗粒低、中剂量组每日给药1次。葛黄解酒颗粒高剂量组每日给药2次,给药间隔6小时。连续给药180天。每周称体重1次,并根据体重调整给药容积。给药和停药观察期间每日对大鼠进行一般观察,每周记录体重和进食量1次。分别在连续灌胃给药90天、180天及停药28天后,每组分别取一定数量大鼠(给药90天10只,给药180天20只,停药28天10只)进行外周血象、血液生化学、尿液、肝脏酒精代谢酶及氧化应激指标、系统尸解及组织病理学检查。结果:1.急性毒性试验:每次给药数分钟后小鼠出现自发活动轻度减少,半小时后症状减轻,约4小时后症状消失。以后连续观察14天,未见动物死亡。动物的外观、行为活动等均未见异常。给药后7天和14天体重与对照组比较,无明显差异(p>0.05)。试验结束时大体解剖未见明显病理改变。2.长期毒性试验:(1)一般观察:葛黄解酒颗粒高剂量组雄性大鼠在给药160天后开始出现腹泻,粪质较稀,直至给药结束。给药前、给药后及停药恢复性观察期内,各给药组每天每100g体重饲料消耗量与对照组相比,无明显差异;各给药组体重与对照组比较有降低趋势,但无统计学差异(p>0.05)(2)外周血象:给药90天后,中剂量组hgb、hct低于对照组(p<0.05);高剂量组rbc、hgb、hct、mchc低于对照组(p<0.05或0.01),mcv、ret%高于对照组(p<0.05或0.01)。给药180天后,低剂量组ly、eo、ret、ret%高于对照组(p<0.05或0.01);中剂量组rbc、hgb、hct、mchc低于对照组(p<0.05或0.01),plt、mcv、mhc、ly、ret、ret%高于对照组(p<0.05或0.01);高剂量组rbc、hgb、mchc低于对照组(p<0.01),mcv、mhc、ly、ret%高于对照组(p<0.05或0.01)。停药28天后,低剂量组ret%低于对照组(p<0.05);低、中、高剂量组hct、eo%、eo高于对照组(p<0.05或0.01);中、高剂量组mchc低于对照组(p<0.05或0.01)。(3)血液生化学:给药90天后,低剂量组tbil低于对照组(p<0.05);中剂量组ck、k+低于对照组(p<0.05);高剂量组ast、tbil、ck、k+低于对照组(p<0.05或0.01)。给药180天后,低剂量组tg低于对照组(p<0.05);中剂量组tg、ck、cl-低于对照组(p<0.05或0.01);高剂量组glu、crea、cl-低于对照组(p<0.05或0.01),k+高于对照组(p<0.01)。停药28天后,中剂量组na+高于对照组(p<0.01);高剂量组tbil、cl-低于对照组(p<0.05),na+高于对照组(p<0.01)。(4)尿液检测:给药90天后,低剂量组蛋白质低于对照组(p<0.01);高剂量组蛋白质、酮体低于对照组(p<0.01)。给药180天后,中剂量组胆红素高于对照组(p<0.05)。停药28天后,中、高剂量组蛋白质低于对照组(p<0.05)。(5)系统尸解:给药90天、180天及停药28天后系统尸解动物,大体观察未见肉眼可见的脏器组织异常。给药90天,低、中、高剂量组肝脏系数、肾脏系数高于对照组(p<0.05或0.01)。给药180天,低、中、高剂量组肝脏系数高于对照组(p<0.05或0.01);中、高剂量组肾脏系数高于对照组(p<0.05或0.01)。停药28天后,低剂量组附睾系数高于对照组(p<0.05)。(6)组织病理学:给药90天、给药180天及停药28天后,给药组和对照组分别显示个别大鼠的肝组织可见肝窦轻度扩张淤血、肝细胞轻度脂肪变性,肺组织可见轻度间质性肺炎。药物组及空白对照组在病变性质、病变数量及严重程度均无统计学差异(p>0.05)。(7)肝脏酒精代谢酶与氧化应激指标检测:给药90天各指标与对照组比较未见统计学差异。给药180天高剂量组GSH-PX高于对照组(p<0.05);中剂量组MDA高于对照组(p<0.05);低剂量组ALDH2低于对照组(p<0.05)。停药28天低剂量组ADH、ALDH2高于对照组(p<0.05或0.01)。结论:1.急性毒性试验:根据本次葛黄解酒颗粒小鼠急性毒性试验所试剂量以及试验结果判断,本品属无明显毒性药物。2.长期毒性试验:葛黄解酒颗粒长期、反复灌胃给予大鼠后主要表现为个别给药组大鼠外周血象、血液生化学及尿液部分指标异常,经分析上述指标变化在本次试验均无明显生物学意义。未见本品引起动物行为活动、外观体征及主要脏器系数和组织病理学有临床意义的生物学变化。根据本次葛黄解酒颗粒大鼠长期毒性试验所试剂量范围、试验周期及试验结果判断,葛黄解酒颗粒临床研究申请所设计临床试验起始剂量和重复用药周期是安全的,本研究可作为临床安全用药的实验依据。此外,葛黄解酒颗粒对正常大鼠肝组织酒精代谢酶及氧化应激相关指标影响较小,其抗酒精性肝病作用机制有待进一步研究。