论文部分内容阅读
目的:本研究主要通过观察1,25（OH）2D3对调节性T细胞（Regulatory T cells,Tregs）的影响,探讨1,25（OH）2D3对大鼠肾间质纤维化的免疫调节作用。方法:（1）选用体重（200±10）g的健康雄性Wistar大鼠,总数为54只。将其随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻组（UUO组,即B组）、1,25（OH）2D3治疗组（C组）,每组各18只。B组及C组采用将单侧输尿管进行结扎,A组采用将输尿管游离,但是不结扎。C组给予1,25（OH）2D3 3ng/100g,A组及B组给予花生油0.5ml,均于每日上午灌胃,实验期间各组正常饮食生活。A组、B组、C组分别于术后1天、3天、7天随机处死6只大鼠,留取血标本及手术侧的肾组织。（2）检测大鼠血肌酐、血钙、血磷水平的变化情况,采用HE及Masson染色观察肾脏组织病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR,RT-PCR）检测大鼠肾脏组织人叉头框蛋白P3（human forkhead box P3,Foxp3）m RNA的水平,采用免疫组化检测各大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle acyin,α-SMA）及FOXP3蛋白水平的变化。结果:（1）B组（UUO组）较同时间点A组（假手术组）相比,肌酐水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;C组（1,25（OH）2D3治疗组）较同时间点B组相比,肌酐水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。A组、B组和C组大鼠同时间点血钙、血磷水平差异无统计学意义（P>0.05）。（2）肾脏组织HE、Masson染色:HE结果示,光镜观察,发现A组（假手术组）各检测时间点肾小管、肾小球未见明显变化,未见单核细胞等炎症细胞浸润,未见明显纤维化。B组（UUO组）第1天和第3天观察肾脏组织,可见肾小管轻度扩张,上皮细胞偶尔出现变性、水肿,极少数上皮细胞会出现坏死,肾间质宽度增加,可见少量的单核细胞等炎症细胞浸润;第7天时观察肾脏组织,可见肾小管扩张更加明显,上皮细胞空泡变性,肾间质可见大量单核细胞浸润,间质宽度明显增加,间质结构广泛破坏。C组较B组同时间点相比,病理改变及纤维化程度减轻。Masson染色半定量分析结果示B组较同时间点A组比较,相对面积显著增加,纤维化程度重,差异有统计学意义（P<0.05）。C组较同时间点A组比较,相对面积减少,纤维化程度减轻,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）大鼠肾脏FOXP3 m RNA相对表达量:B组与A组同时间点比较,肾组织FOXP3 m RNA水平显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。与B组同时间点比较,C组肾组织FOXP3 m RNA水平显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）各组大鼠肾组织α-SMA、FOXP3蛋白表达情况:B组与A组同时间点相比,肾组织α-SMA表达显著升高,FOXP3表达显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。随着梗阻时间延长,B组肾组织FOXP3表达显著降低,α-SMA表达显著升高。C组与B组同时间点相比,肾组织α-SMA表达明显降低,FOXP3表达明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）肾间质纤维化中可能伴有Treg细胞数量减少。（2）1,25（OH）2D3可能通过免疫调节作用上调Treg细胞减缓肾间质纤维化的进展。