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鸽Ⅰ型副黏病毒（Pigeon paramyxoviruses type 1,PPMV-1）又称鸽新城疫病毒,常引起鸽新城疫,是危害养鸽业的重要病原之一。PPMV-1是新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）在鸽群中的抗原变异毒株,目前国内常见的PPMV-1属于NDV基因VⅠ型。近年来,鸽新城疫在我国多个省份均有暴发,感染鸽的发病率和死亡率都较高,给养鸽业造成巨大损失。接种疫苗是防控病毒病最有效的手段,但是,目前国内对于鸽新城疫的防控尚无商品化疫苗,临床多使用鸡新城疫疫苗,常见疫苗株为La Sota和B1等,这些疫苗株与PPMV-1流行株基因型存在差异,抗原差异性也较大,因此,保护率低,研发特异性针对鸽新城疫的生物制剂成为当务之急。本研究拟从临床发病鸽样品中分离PPMV-1毒株,并进行遗传进化分析,进一步利用分离的PPMV-1毒株制备油乳剂灭活疫苗和卵黄抗体,分别确定其免疫保护效果和治疗效果,以期为防控鸽新城疫提供材料。研究取得以下结果。1.成功分离到1株鸽Ⅰ型副黏病毒2019年宁夏回族自治区某公棚发生鸽新城疫,病鸽呈头颈扭曲状,部分病鸽呼吸伴有呼噜音,排绿色稀便。剖检发现,肺脏淤血,有出血点;肝脏肿大有出血点;肾脏肿大;嗉囊出血;肌胃角质层下方有出血点;肠黏膜水肿。镜检发现,肺淤血,肺泡壁上皮细胞脱落,肺泡腔内有红细胞;肝索紊乱,肝细胞肿大;肾小管上皮细胞变性坏死,肾间质有少量红细胞;脾小梁结构不清晰,淋巴细胞数量减少,组织间有红细胞。采集病料,经SPF鸡胚盲传3代后分离到一株PPMV-1,RT-PCR和测序鉴定后命名为Pigeon/NX。经测定,Pigeon/NX的MDT和ICPI分别为96 h和0.41,全基因组序列为15192 nt,基因组顺序为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’,符合NDV基因组特性。遗传进化分析发现,Pigeon/NX与pi/CH/LHLJ/131237和Pigeon/China/BJ/2013亲缘关系较近,与市面上常用的疫苗株La Sota株和B1株亲缘关系较远。使用Pigeon/NX和La Sota进行交叉血凝抑制试验,R系数为0.71（小于0.8）,表明Pigeon/NX和La Sota株之间存在抗原差异。对Pigeon/NX f基因的遗传进化分析发现,Pigeon/NX与ClassⅡ基因VIb亚型NDV处于同一分支。Pigeon/NX F蛋白裂解位点处氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,与其他PPMV-1和禽源NDV强毒株的F蛋白裂解位点一致。2.利用分离的Pigeon/NX制备了鸽新城疫灭活疫苗并进行了攻毒保护试验Pigeon/NX灭活疫苗的制备SPF鸡胚扩增Pigeon/NX,测定EID50为10-7.33/0.2 m L。收集HA效价大于8（log2）的Pigeon/NX尿囊液制备油乳剂灭活疫苗,制备的Pigeon/NX灭活疫苗剂型为油包水型,接种LB和TSA培养基无细菌生长,黏度检测结果为5.2 s,接种雏鸽14 d未见明显异常。将制备的Pigeon/NX疫苗与商品化La Sota灭活疫苗分别以2×10~6 EID50免疫鸽群,14 d后以相同剂量加强免疫,首免后每隔7 d检测血清抗体水平,结果显示,La Sota组从首免7 d后开始产生抗体,抗体HI效价为0.25±0.25（log2）;Pigeon/NX组从首免14 d开始产生抗体,抗体HI效价为1.00±0.67（log2）,显著低于La Sota组的1.75±0.25（log2）（P＜0.05）;在首免21 d,La Sota组抗体HI效价5.25±0.33（log2）,Pigeon/NX组抗体HI效价为5.00±0.92（log2）,差异不显著;在首免28 d,La Sota组抗体HI效价6.5±0.33（log2）,Pigeon/NX组抗体HI效价为6.25±0.25（log2）,差异不显著。在免疫28 d,对照组、La Sota免疫组和Pigeon/NX免疫组点眼滴鼻5×10~6 EID50 Pigeon/NX。在攻毒第2天,对照鸽精神沉郁、食欲不振,在第11天死亡1只,第13天死亡2只,La Sota组在第13天死亡1只鸽;Pigeon/NX组鸽未见明显异常。3.利用分离的Pigeon/NX制备了鸽新城疫卵黄抗体并进行了治疗效果试验Pigeon/NX疫苗免疫产蛋鸡3次,首免14 d后,每7 d收集鸡蛋,检测鸡蛋卵黄抗体HI效价,第35天卵黄抗体HI效价大于10.40±0.93（log2）,极显著高于第21天抗体效价（P＜0.01）,第35天到第70天差异不显著（P＞0.05）,从35 d开始收集鸡蛋制备卵黄抗体。制备的卵黄抗体接种于LB和TSA培养基无细菌生长,接种雏鸽14 d未见异常。通过鸡胚中和试验测定卵黄抗体（HI效价11（log2））中和效价,结果显示,制备的卵黄抗体对PPMV-1的中和效价为14.15（log2）。1 m L卵黄抗体（HI效价11（log2））皮下注射雏鸽1 d后,血清中抗体HI效价达到6.25±0.25（log2）,第14天血清抗体HI效价为4.75±0.67（log2）,与第1天相比,血清抗体HI效价极显著降低（P＜0.01）。2×10~7 EID50 Pigeon/NX感染雏鸽1 d后,卵黄抗体治疗组皮下注射卵黄抗体（HI效价11（log2））1 m L,连续观察14 d,卵黄抗体治疗组全部存活,PBS对照鸽全部死亡。RT-PCR检测结果显示,第5天,PBS对照组均为PPMV-1阳性,卵黄抗体治疗组有1只鸽为PPMV-1阳性;第7天,PBS对照组存活的3只鸽均为PPMV-1阳性,卵黄抗体治疗组均为PPMV-1阴性;第14天,卵黄抗体治疗组未检测到PPMV-1。本研究成功分离到了1株PPMV-1 Pigeon/NX,并利用分离的Pigeon/NX制备了鸽新城疫灭活疫苗和卵黄抗体。研究发现,制备的Pigeon/NX灭活疫苗和卵黄抗体均具有良好的免疫保护效果和治疗效果。上述研究结果为进一步防控鸽新城疫提供了理论依据和候选材料。