银杏复方制剂对家兔肾脏缺血再灌注的保护作用及机制

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目的:本研究采用肾脏缺血再灌注损伤家兔作为模型,研究银杏复方制剂对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及作用机理,为新药开发提供科学依据。方法:40只家兔分别用3%戊巴比妥钠(按30mg/kg)进行腹腔注射麻醉,背位交叉固定于手术台,腹部正中切口,分离右肾并切除,游离暴露左肾及左肾蒂,对照组家兔不夹闭左肾及左肾蒂,直接关腹;缺血组家兔夹闭肾蒂阻断肾血流关腹;再灌注组和治疗组家兔均夹闭肾蒂阻断肾血流30min再灌注30min,然后关腹。所有家兔于再灌注30min后处死取肾保存待用。治疗组给予银杏复方制剂灌胃(10ml/kg),每天一次,连续给药4周,对照组、缺血组和再灌注组均以等量生理盐水灌胃。将家兔按再灌注时间开腹取静脉血检测血清BUN、Cr。同时取肾组织用10%甲醛溶液固定24h后,乙醇脱水,石蜡包埋,切片,苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察肾组织病理变化。采用硫代巴比妥酸法检测肾组织中MDA含量;黄嘌呤氧化法检测肾组织中SOD、GSH-Px活性。采用免疫组化SP法检测肾组织中细胞间粘附分子-1和P-选择素表达。结果:1再灌注组与对照组比较,MDA含量显著上升,SOD、GSH-Px活性明显降低,有显著性差异;银杏复方治疗组MDA含量下降,SOD、GSH-Px活性上升,与再灌注组比较具有差异显著性;2在光学显微镜下,对照组肾小管排列整齐,肾间质无明显充血、水肿;肾缺血30min组肾小管排列紊乱稀疏,且肾小管明显扩张伴肾间质充血、水肿;肾缺血30min再灌注30min组肾小管排列更加紊乱,部分上皮细胞变性,肾间质充血水肿明显加重;银杏复方治疗组肾小管排列紊乱明显减轻,上皮细胞无明显变性,肾间质充血减轻。3再灌注组血清BUN和Cr明显升高,与对照组相比有统计学意义,说明模型制备成功。银杏复方制剂组能明显降低急性缺血再灌注损伤状态下家兔BUN和Cr水平,与再灌注组比较具有统计学意义。4缺血再灌注组肾组织细胞间粘附分子ICAM-1、P-selectin表达水平升高,经银杏复方制剂处理后肾组织细胞间粘附分子ICAM-1、P-selectin表达受到抑制,与再灌注组比较具有统计学意义。结论:1银杏复方制剂明显降低血清BUN和Cr水平,并明显改善肾间质水肿和肾小管上皮细胞功能,从而保护缺血再灌注肾脏组织。2银杏复方制剂能明显降低缺血再灌注肾组织MDA含量,增加SOD、GSH-PX活性,提示其具有明显清除氧自由基保护肾脏组织作用。3细胞间粘附分子ICAM-1、P-selectin参与肾缺血再灌注损伤机制,银杏复方制剂能够明显减少其表达,对肾缺血再灌注损伤家兔有保护作用。
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