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随着组织工程的迅速发展，生物材料日益受到人们的关注。胶原蛋白做为一种天然生物材料，因其具有低抗原性、生物可降解性、优越的生物相容性并且还有利于细胞贴附和迁移的特点，被广泛应用于组织工程领域。重组类人胶原蛋白Ⅱ(recombinant human-like collagenⅡ，RHLCⅡ)是一种由人类胶原基因的mRNA反转录成cDNA重组入大肠杆菌经高密度发酵而成的蛋白，与动物体提取的胶原蛋白相比，具有安全性高、无病毒隐患的优点，同时还具备大规模产业化生产的特点，有很好的应用前景。组织工程支架材料的构建是RHLCⅡ应用于组织工程的前提，本文采用戊二醛交联的方法将RHLCⅡ制作成膜状和海绵状组织工程支架材料，探讨不同浓度的戊二醛对RHLCⅡ组织工程支架材料的性能和生物相容性的影响。1．采用终浓度为0.01％，0.025％，0.05％，0.075％，0.1％的戊二醛对RHLCⅡ进行交联，利用自然干燥法制备RHLCⅡ膜。当戊二醛浓度在0.025％以上时，能制备出RHLCⅡ膜。采用BHK-21细胞对RHLCⅡ膜进行细胞毒性评价，细胞毒性评价均为1级，细胞毒性实验合格。通过倒置显微镜和扫描电子显微镜观察到成纤维细胞均能贴附于RHLCⅡ膜。通过MTT法，成纤维细胞在RHLCⅡ膜上均能实现增殖且增殖情况没有显著性差异(P＞0.05)。此外，当戊二醛浓度在0.05％以上时，RHLCⅡ膜的抗张强度可以达到11MPa。0.05％的戊二醛浓度为采用自然干燥法制备RHLCⅡ膜的最优浓度。2．改进交联工艺，用无菌风吹干法制备RHLCⅡ膜。采用终浓度为0.05％和0.1％的戊二醛对RHLCⅡ进行交联。RHLCⅡ膜细胞毒性评价均为0-1级，细胞毒性实验合格。成纤维细胞在RHLCⅡ膜上均能实现贴附和增殖，并且增殖情况没有显著性性差异(P＞0.05)。通过扫描电子显微镜观察到RHLCⅡ膜上的成纤维细胞均能连接成片，形成多层细胞。此外，当戊二醛浓度为0.05％和0.1％时，RHLCⅡ膜抗张强度均能达到11MPa。无菌风吹干法制备RHLCⅡ膜，选择0.05％的戊二醛浓度。3．采用终浓度为0.01％，0.05％，0.1％，0.15％，0.2％的戊二醛交联RHLCⅡ，通过冷冻干燥法制备RHLCⅡ海绵。当戊二醛浓度在0.05％以上时，能制备出RHLCⅡ海绵，细胞毒性评价均为0-1级，细胞毒性实验合格。倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电子显微镜观察及冰冻切片HE染色结果表明成纤维细胞均能很好地贴附于RHLCⅡ海绵上并且生长情况良好。通过细胞计数法，当戊二醛浓度在0.1％以上时，成纤维细胞在各RHLCⅡ海绵上的增殖情况没有显著性差异(P＞0.05)，并且优于戊二醛浓度为0.05％的RHLCⅡ海绵(P＜0.05)。另外，当戊二醛浓度在0.1％以上时，RHLCⅡ海绵的孔隙率均大于90％，抗张强度可以达到0.11MPa。0.1％的戊二醛浓度为制备RHLCⅡ海绵的最优浓度。