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宫颈癌是全世界范围内女性肿瘤中第二大常见恶性肿瘤,仅次于乳腺癌。虽然随着医学科学技术的进步,手术技术不断进步、放化疗的不断改进拯救了很多患者,给宫颈癌患者带来了不可估量的益处,使得宫颈癌的死亡率、生存期得到大大改善。但是肿瘤复发及耐药依然是宫颈癌患者治疗的难点,是造成宫颈癌患者死亡的主要原因。因此,努力探索新的治疗靶点及治疗策略具有重要的临床意义。由陈旦洋教授发明合成的化合物4(CLT003)[(2,6-二异丙基)-5-氨基-1-氢-异吲哚-1,3-二酮]是一种苯酞酰亚胺类似物,旨在治疗视网膜水肿。在我们的前期实验工作中发现,CLT003可抑制宫颈癌、胰腺癌细胞系的增殖,于是我们进一步设计实验,旨在探索CLT003在宫颈癌中的抗癌作用及机制。目的:1.检测CLT003在乏氧微环境中对宫颈癌HeLa、C33A细胞在增殖及凋亡方面的影响,联合宫颈癌常用化疗药顺铂、紫杉醇,观察其在联合用药中的作用。2.观察CLT003在宫颈癌HeLa、C33A细胞中对糖代谢的影响。方法:1.在低氧条件下培养HeLa、C33A细胞,通过CCK8、EDU观测CLT003单药和CLT003联合顺铂或者紫杉醇对细胞增殖的影响;Annexin V-PI法检测凋亡及Western-blot方法检测凋亡相关蛋白的表达情况。2.通过葡萄糖摄取检测试剂盒观察CLT003对宫颈癌细胞糖摄取的影响,通过RT-PCR、Western-blot技术检测HIF-1α、GLUT1、LDHA等的mRNA及蛋白水平的变化。结果:1.1 CLT003单用及联合化疗药顺铂或紫杉醇,都能有效抑制宫颈癌HeLa、C33A细胞的增殖,并且CLT003对肿瘤细胞的抑制作用呈计量依赖性,在一定范围内(0,2,4,8,16,32,64,128uM),随CLT003的浓度增大而抑制作用逐渐增强。CLT003在HeLa及C33A细胞中的IC50分别为为11.521uM、12.529uM。1.2 CLT003联合化疗药顺铂或紫杉醇可明显提高宫颈癌HeLa、C33A细胞对化疗药的敏感性,在对癌细胞同等杀伤作用下,可明显减少化疗药的使用剂量。(差异有统计学意义,P<0.05)。1.3检测细胞凋亡发现,随着CLT003浓度的增加(0、2.5、5、10μM),细胞凋亡的比例明显增加(差异有统计学意义,P<0.05)。2.RT-PCR、Western-blot技术检测HIF-1α、GLUT1、LDHA等的mRNA及蛋白水平显示:CLT003可随药物剂量的增加,从mRNA及蛋白水平下调HIF-1α、GLUT1、LDHA的表达(差异有统计学意义,P<0.05);通过葡萄糖摄取检测试剂盒也观察到CLT003可减少宫颈癌细胞在低氧无糖环境中对葡萄糖的摄取(差异有统计学意义,P<0.05)。结论:1.CLT003呈剂量依赖性的抑制宫颈癌HeLa、C33A细胞系的增殖;促进细胞凋亡;联合化疗药顺铂或紫杉醇可以提高宫颈癌细胞对化疗药的敏感性。2.CLT003可能通过抑制HIF-1α及下游靶基因GLUT1、LDHA破坏有氧糖酵解而发挥抗肿瘤活性。