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目的:探讨人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stromal cells,hUC-MSCs)经小鼠瘢痕皮肤组织匀浆刺激后分泌的外泌体是否对创面愈合过程的效应细胞成纤维细胞具有生物学效应并调节瘢痕重塑过程。方法:(1)瘢痕塑型期微环境刺激的人脐带间充质干细胞外泌体的提取及鉴定:取创面上皮化完成的小鼠瘢痕组织,运用物理研磨及高速离心获得瘢痕组织匀浆(Scar tissue homogenate,STH)。STH刺激人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stromal cells,hUC-MSCs),利用Total Exosome Isolation试剂盒分离提取瘢痕组织匀浆刺激的人脐带间充质干细胞外泌体(STH-hUC-MSCsExos),经Western-blot、Nanosight、电镜分析技术鉴定。(2)STH-hUC-MSCsExos对皮肤成纤维细胞增殖、迁移及分泌创面愈合相关因子能力的影响:瘢痕组织匀浆分别设立高(100ug/m L)、中(50ug/m L)、低(30ug/m L)浓度组刺激hUC-MSCs提取外泌体,以传统hUC-MSCs-Exos(Tra-Exos)为阳性对照,利用CCK8法及划痕实验检测不同浓度瘢痕组织匀浆刺激的hUC-MSCs-Exos对皮肤成纤维细胞增殖、迁移能力的影响;利用q PCR技术检测STH-hUC-MSCs-Exos对成纤维细胞分泌创面愈合相关因子能力的影响。(3)STH-hUC-MSCs-Exos对瘢痕重塑过程的影响研究:利用C57/BL6小鼠建立皮肤创面愈合模型,设立模型(Model)组、hUC-MSCs组、Tra-Exos组、STH-hUC-MSCs-Exos组,在创面愈合第14天,即创面上皮化完成后,按照分组分别进行相应干预处理。干预后的第3天、第5天取材做HE染色、Masson染色、CD31免疫荧光染色,观察胶原分布情况及微血管生成。结果:(1)Western-blot结果显示STH-hUC-MSCs-Exos表达CD9、CD63、HSP-70外泌标记蛋白;Nanosight结果显示STH-hUC-MSCs-Exos直径约为130nm,符合外泌体大小要求;透射电镜下可见STH-hUC-MSCs-Exos为杯口状的双层脂膜结构。(2)细胞增殖实验:STH-hUC-MSCs-Exos具有促进成纤维细胞增殖的能力,且促进能力随瘢痕匀浆浓度的降低而增强,低匀浆外泌体组与Tra-Exos组相比促进作用具有统计学意义,P<0.01。(3)划痕实验:STH-hUC-MSCs-Exos具有促进成纤维细胞迁移的能力,且随瘢痕匀浆浓度的降低促进作用逐渐增强,低匀浆外泌体的促进作用与Tra-Exos组相比具有统计学意义,P<0.001。(4)q PCR结果显示STH-hUC-MSCs-Exos具有下调促纤维化因子TGF-β1表达的能力。(5)HE染色:第3天时,STH-hUC-MSCs-Exos组与其他组相比表皮层明显较薄且皮肤层次结构清晰,皮肤附属结构生成增多且排列整齐;第5天时,所有组相比第3天皮肤结构变得更加整齐,STH-hUC-MSCs-Exos组皮肤附属器生成最多且排列最整齐。(6)Masson染色:第3天时,STH-hUC-MSCs-Exos组胶原纤维结构最为匀称且排列整齐;与模型组相比,小鼠瘢痕模型经各外泌体组或干细胞组干预后胶原容积分数降低。第5天时,相比第3天各组胶原纤维排列更加整齐,STH-hUC-MSCs-Exos组胶原容积分数最低,且与其他各组相比均有统计学意义。(7)CD31免疫荧光染色:各外泌体组及干细胞组对微血管的生成起到抑制作用。第3天时,STH-hUC-MSCs-Exos抑制微血管生成的能力最强,且与hUC-MSCs组有统计学意义P<0.01;第5天时,与hUC-MSCs组相比STH-hUC-MSCs-Exos仍然显示出了有效的抑制微血管生成的作用,P<0.05。结论:瘢痕塑型期微环境可以优化hUC-MSCs-Exos的生物学效应,增强hUCMSCs-Exos促进成纤维细胞增殖、迁移的能力,STH-hUC-MSCs-Exos可以通过下调促纤维化因子表达,减少胶原沉积,抑制微血管生成减轻瘢痕。