【摘 要】
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钙激活蛋白酶(calpain)系统是高度可调的、依赖于Ca2+的蛋白水解酶系统。它的水解可以促使肌肉中完整的肌原纤维发生崩解,从而使肉嫩化。在钙激活蛋白酶系统中,钙激活蛋白酶
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钙激活蛋白酶(calpain)系统是高度可调的、依赖于Ca2+的蛋白水解酶系统。它的水解可以促使肌肉中完整的肌原纤维发生崩解,从而使肉嫩化。在钙激活蛋白酶系统中,钙激活蛋白酶激活蛋白(calpain activator)是钙激活蛋白酶的正调节因子,钙激活酶活性的发挥主要是由于钙激活蛋白酶激活蛋白的激活作用。研究表明,UK114(山羊肝脏肿瘤抗原)是calpain-1的激活蛋白。UK114具有保守的氨基酸序列,广泛分布于原核生物和真核生物之中,这些蛋白通常130个氨基酸组成,在动物肝脏和肾脏中大量表达,其表达量在肝细胞的癌组织中表现量明显降低,同时表达量亦随着癌细胞的分化程度变差而下降。本课题组前期通过UK114蛋白对MFC小鼠前胃癌细胞的体内体外对肿瘤细胞的试验,证明UK114具抗肿瘤的活性,而且在很大程度上引起肿瘤细胞凋亡,由于钙激活蛋白酶激活蛋白在生物中分布的广泛性,本试验采用人的正常肝脏细胞和Hela细胞作为材料,使用RNA干扰、荧光定量PCR、EGTA处理等技术手段,验证在整个调节过程中UK114与calpain-5之间的相互作用以及Ca2+在调节过程中的作用。对体外培养细胞进行RNA干扰后,通过定量分析、细胞计数以及成克隆试验,发现UK114与calpain-5表达量的降低均会导致肿瘤细胞的减少。
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