论文部分内容阅读
目的:探究亚麻醉剂量氯胺酮调控的N-甲基-D-天冬氨酸受体一氧化氮(NMDA-NO)通路在小鼠术后认知功能障碍(POCD)中的作用机制。方法:30只昆明小鼠随机分为空白对照组(A组)、手术组(B组)、手术+亚麻醉剂量氯氨酮酮组(C组)三组,A组不做任何处理,B、C两组行左颈动脉分离术,C组术中腹腔注射亚麻醉剂量氯胺酮0.1mg,术毕缝合并消毒伤口,待小鼠完全清醒并可以自由活动后放回动物中心继续喂养,分别于术后第1d、3d、5d、7d进行水迷宫实验。另30只昆明小鼠以同样分的组和实验处理进行操作,于术后九小时断头取海马组织,制得海马匀浆,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测NMDAR1、NMDAR2A和NMDAR2B蛋白的表达情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组小鼠海马匀浆中炎性因子TNF-α和IL-6的表达,免疫组化(IHC)分析NMDAR2B阳性表达强度同时进行蛋白定位以及用一氧化氮合酶试剂盒检测各组小鼠海马匀浆中一氧化氮合酶(NOS)的相对活力。结果:免疫组化镜下结果显示,A组NMDAR2B蛋白染色较深呈中等阳性(++),B组NMDAR2B蛋白染色很深呈强阳性(+++),C组NMDAR2B蛋白染色很浅呈弱阳性(+)。另外观察到NMDAR2B蛋白主要集中在海马CA1区表达且三组小鼠表达差异有统计学意义,而在CA3区的表达三组小鼠无明显差异。B组小鼠潜伏期于术后第1d、3d明显延长(63.54±32.25比15.42±7.47、35.37±39.34,51.5±25.36比13.1±6.15、25.8±34.53,均P<0.01),A、C两组潜伏期差别无统计学意义。B组小鼠目标象限百分比于术后第1d明显降低(21.94±9.64比37.51±9.52、48.47±20.32,P<0.01)。C组小鼠海马匀浆中IL-6、TNF-α含量明显降低[IL-6(ng/ml):1.95±0.95比2.06±0.46、5.36±0.49,TNF-α(pg/ml):21.84±6.54比25.73±13.84、94.48±35.72,均P<0.05)]。Western Blot结果提示:C组小鼠海马的匀浆中NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白表达量和NOS相对活力均较空白对照组和手术组明显降低,C组小鼠NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白灰度值比分别较手术组降低(1.39±0.23)、(2.32±3.13)、(3.24±0.46)倍,NOS的相对活力RFU值较手术组降低(2.99±1.96)倍,较空白对照组降低(1.11±1.17)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:亚麻醉剂量氯胺酮能拮抗NMDA受体,抑制NOS活性,减少信号通路下游的炎症因子释放,从而降低POCD的发病率。