论文部分内容阅读
目的:(1)对细叶石仙桃全草的石油醚和乙酸乙酯回流提取物分别进行硅胶柱色谱和HSCCC分离纯化,对所得化学成分进行理化性质和结构鉴定;(2)分离和纯化细叶石仙桃多糖,并进行结构分析和体内、体外生物活性研究;为石仙桃药材临床应用提供参考依据。方法:(1)采用硅胶柱色谱对石油醚提取物进行分离和纯化;采用柱色谱和HSCCC相结合的方法对乙酸乙酯提取物进行分离和纯化;(2)对所得化学成分进行HPLC纯度分析、熔点测定、红外光谱和质谱检测,分析化合物的结构;(3)水提醇沉法提取多糖,苯酚-硫酸法测定多糖含量,将粗多糖依次通过除蛋白、去色素和DEAE-52柱、sephadexG-200柱纯化,HPLC法分析纯度;(4)结合高效液相色谱、气相色谱、红外光谱等方法和化学分析法初步鉴定多糖的一级结构及部分理化性能:(5)通过体外抗氧化和抗肝脂质过氧化实验、脾淋巴细胞转化实验、抑菌实验和小白鼠体内镇痛实验,分析多糖的抗氧化、提高免疫力、抑制细菌和镇痛等生物活性。结果:(1)石油醚浸膏经过硅胶柱色谱石油醚:乙酸乙酯=20:1洗脱部分得到两个结晶;乙酸乙酯浸膏经过硅胶柱色谱粗分离后,再进行HSCCC纯化得到两个化合物。(2)TLC和HPLC鉴定纯度;经过熔点、红外和质谱鉴定这四种化合物分别为正二十烷、十九烯、4,4′-二甲氧基-2,2′-二甲基联苯和1,3-二二胺-5,6-二氢-7-茴香醚间二氮杂萘,均为首次从该植物中分离得到。(3)细叶石仙桃粗多糖的含量为14.01%;经过两次柱层析分离得到一个单一组分;经HPLC鉴定为相对均一组分。(4)经IR图谱分析显示具有多糖的特征吸收峰,经GC分析其单糖组成为木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为13.33:24.13:5.59:3.10。高碘酸氧化和Smith降解表明石仙桃多糖一定具有1→6、1→2和1→3连接,而且以1→2连接为主。(5)体外抗氧化实验表明,多糖浓度为3.0mg/mL时对羟自由基的清除率达到33.7%,且呈现剂量依赖性;在多糖浓度为2.0mg/mL时,对超氧阴离子的清除率达到最高值70.7%;当多糖浓度达到1.5mg/mL时对脂质过氧化作用抑制率达到97.06%;体外细胞培养表明,多糖能够促进脾淋巴细胞转化;小鼠体内镇痛实验表明,多糖具有明显的镇痛作用。结论:经柱色谱和HSCCC分离纯化从石油醚和乙酸乙酯提取部分得到四种化合物,为首次得到。经纯化得到的相对均一多糖为杂多糖,具有较强的抗氧化、免疫和镇痛功效。