论文部分内容阅读
APOBEC3G是一种新近发现的具有抗病毒活性的胞嘧啶脱氨酶家族成员,能抑制vif缺陷HIV-1的复制,能使HIV-1基因组发生突变,APOBEC3G将逆转录成的第一条cDNA链(负链)上的大多数C碱基脱去氨基变成U碱基,导致了C-U突变(在正链上则表现为G-A突变),突变后的HIV基因组往往失去正常的功能,从而抑制了vif缺陷HIV-1的复制。近来研究表明APOBEC3G具有广谱抗病毒的生物学活性,该蛋白不仅能显著抑制HIV的复制,而且能显著抑制HBV的复制。【目的】探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide like 3G,APOBEC3G)(也称为CEM15)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用及其机制。【方法】应用脂质体将质粒pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis和pcDNA3.1/myc-His-c分别瞬时转染入2.2.15细胞株中,转染后,RT-PCR证实转染基因的表达,Western Blot证实蛋白的表达;半定量RT-PCR检测各组转染细胞中HBs-mRNA和HBe-mRNA的水平,ELISA检测各组转染细胞上清中HBsAg和HBeAg表达情况。未转质粒细胞作为空白对照组。【结果】质粒pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis、pcDNA3.1/myc-His-c转染细胞后,RT-PCR、Western Blot检测证实APOBEC3G基因与蛋白在2.2.15细胞均有表达,半定量RT-PCR检测发现: pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis载体转染组细胞中HBs-mRNA、HBe-mRNA水平都明显低于pcDNA3.1/myc-His-c载体转染组和空白对照组(F=27.060,P<0.01,和F=79.087,P<0.01)。ELISA检测发现:同pcDNA3.1/myc-His-c载体转染组和空白对照组相比较,pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis载体转染组细胞培养液上清中,HBsAg和HBeAg的表达均明显下调(F=164.45,P<0.01和F=265.08,P<0.01),HBsAg HBeAg的抑制率分别为70.38%、62.88%。表明APOBEC3G在体外可以抑制HBV复制,可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗乙肝病毒感染。