糖蛋白在生物体内丰度较低,且糖蛋白的异常变化常常伴随着许多疾病的发生如肿瘤、类风湿关节炎、艾滋病等。因而,对于糖蛋白的分离与富集方法的研究具有重要的意义。在糖蛋白的分离与富集方法中,凝集素亲和色谱是应用最为广泛的方法之一。近年来温度敏感色谱逐步成为研究的热点,温度敏感亲和色谱不仅可以保证对目标分子的特异性富集,而且可以仅通过改变温度来控制目标分子的释放,而不需要改变流动相的组成和pH值。本文主要采用两种可控自由基聚合法将温度敏感色谱材料(NIPAAm)与伴刀豆凝集素(ConA)修饰到硅胶表面,从而实现在只改变温度的条件下对糖蛋白进行分离和富集。ATRP法通过控制2-溴异丁基酰溴在它与乙酰氯混合物中的摩尔比来控制引发位点的接枝密度(10%、30%、50%与70%)。之后引入活性中间体NAS和NIPAAm,它们的摩尔比为1/10。最后,通过NAS将ConA引入到硅胶表面,形成凝集素修饰的温度敏感亲和色谱材料。之后将卵清蛋白与不同接枝密度的Silica@P(NIPAAm-co-ConA)分别在10℃与50℃的且不同pH的缓冲液中进行孵育,检测该材料在离线条件下对卵清蛋白的捕获与释放情况。结果表明,Silica@P(NIPAAm-co-ConA)在离线条件下,在pH为7,接枝密度为50%的情况下对卵清蛋白的捕获与释放效果最好,释放量可达到1.3 mg/g。利用RAFT法合成接枝密度为50%的温度敏感亲和色谱材料,同时也将单体NAS与ConA修饰到硅胶表面。傅里叶红外光谱、X-射线光电子能谱以及热失重分析结果表明所合成的产物均按照预期的技术路线进行。之后将该功能性温敏材料以pH为7的磷酸盐缓冲液作为流动相进行HPLC分析发现,10℃时固定相Silica@P(NIPAAm-co-ConA)可以对辣根过氧化物酶进行特异性的富集,并且在50℃下可实现目标分子的释放。研究结果表明已成功将凝集素引入到温度敏感色谱固定相表面并且该材料具有一定的温敏性和对糖蛋白的捕获与释放性能,实现了在仅通过改变温度来控制目标分子的富集。