三肽化合物酪丝缬肽对肺癌转移的治疗作用及对整合素—粘附斑激酶(FAK)信号传导通路影响的研究

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目的:观察三肽化合物酪丝缬肽(tyroservatide, YSV)对人肺癌细胞转移的治疗作用,初步探讨其影响整合素-粘附斑激酶(focal adhension kinase, FAK)信号传导通路的可能作用机制。方法:1.应用MTS法观察YSV对体外培养的三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞与Matrigel胶粘附能力的影响。2.应用Transwell小室实验模型观察YSV对体外培养的三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞侵袭能力的影响。3.应用明胶酶谱分析法,观察YSV对三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞培养上清中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs) MMP-2和MMP-9蛋白活性的影响;应用免疫印迹技术观察YSV对三种肺癌细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响;应用实时荧光定量PCR观察YSV对三种肺癌细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA水平的影响。4.应用免疫印迹技术观察YSV对三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞中FAK Tyr397和FAK Tyr576/577磷酸化水平的影响;应用免疫印迹技术观察YSV对三种肺癌细胞中FAK蛋白表达的影响;应用实时荧光定量PCR观察YSV对三种肺癌细胞中FAK mRNA水平的影响。5.应用流式细胞术观察YSV对三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞中整合素β1和整合素β3蛋白表达的影响;应用实时荧光定量PCR观察YSV对三种肺癌细胞中整合素β1和整合素β3 mRNA水平的影响。结果:1.YSV可以显著抑制三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞在体外与Matrigel胶的粘附,对三种肺癌细胞的最高抑制率分别可达37.08%,36.87%和41.34%。2.YSV可以显著抑制三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞的体外侵袭能力,对三种肺癌细胞的最高抑制率分别可达53.87%,62.10%和64.44%。3.YSV可以显著抑制三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞培养上清中MMP-2和MMP-9的蛋白活性;YSV可以显著抑制三种肺癌细胞中MMP-2和MMP-9的mRNA水平及蛋白表达。4.YSV可以显著降低三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞中FAK Tyr397和FAK Tyr576/577的磷酸化水平;YSV可以显著抑制三种肺癌细胞中FAK的mRNA水平及蛋白表达。5.YSV可以显著抑制三种高转移性人肺癌细胞株95D,A549和NCI-H1299细胞中整合素β1和整合素β3的mRNA水平及蛋白表达。结论:YSV对肺癌细胞的体外粘附和侵袭能力有明显的抑制作用,具有抗肺癌细胞转移效果。该作用可能是通过下调肺癌细胞的整合素β1、整合素β3的水平,降低FAK的活性并抑制其表达,从而抑制了肿瘤细胞的整合素-FAK信号传导途径,导致其下游效应分子基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的表达水平下降、活性受到抑制来实现的。
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