目的采用化湿定痛汤干预膝骨关节炎（knee osteoarthritis,KOA）模型大鼠,观察其对大鼠膝关节滑膜炎症及滑膜细胞中Ras/Raf/Mek/Erk信号通路的影响,探讨该方对KOA的作用机制,为其临床应用和后续研究提供理论基础。方法1.KOA模型大鼠的建立及分组:Ⅱ型胶原酶膝关节腔注射法构建KOA模型。根据随机数字表法将38只SD大鼠随机分成空白组和造模组,分别在第1天、第4天对造模组大鼠采用Ⅱ型胶原酶膝关节腔注射,同一时间点对空白组大鼠采用生理盐水膝关节腔注射。采用膝关节核磁共振对KOA大鼠进行模型鉴定,造模成功后再将模型组大鼠随机分为模型组、化湿定痛汤组及mek抑制剂组。2.模型鉴定:第7天从空白组和造模组各取3只大鼠进行膝关节核磁共振扫描,并用MOAKS评分鉴定是否造模成功。3.药物干预:空白组、模型组给予大鼠灌胃生理盐水;化湿定痛汤组给予大鼠灌胃化湿定痛汤;mek抑制剂组给予大鼠腹腔注射mek抑制剂PD98059。4.大鼠膝关节肿胀度的测量:分别于第0、7、14、21、28、35天利用电子游标卡尺测量大鼠患侧膝关节直径以观察其患侧肿胀度。5.患肢膝关节软骨面T2值检测:干预28天后,采用核磁共振T2 mapping序列扫描各组大鼠膝关节,测量各组大鼠软骨的T2值。6.大鼠滑膜组织形态学观察:采用H&E染色观察大鼠滑膜组织炎症浸润情况。7.滑膜细胞指标观察和检测:q-PCR检测各组大鼠滑膜组织中Ras、Raf、Mek、Erk m RNA表达,Western-blot检测各组大鼠滑膜组织Ras、Raf、p-Mek、p-Erk蛋白表达;并对各组数据进行比较分析。8.大鼠血清ELISA检测:ELISA检测各组大鼠血清中IL-1、IL-18的含量。结果1.KOA大鼠模型鉴定正常组大鼠患侧膝关节软骨表面光滑完整,关节间隙等宽,股直肌肌腱正常无水肿,关节腔存在少量滑液,关节周围无软组织肿胀及筋膜积液。模型组大鼠膝关节软骨表面毛糙,关节间隙相对等宽,股直肌肌腱水肿明显,关节腔存在大量积液,关节周围软组织肿胀且存在筋膜积液。模型组膝关节MRI半定量评分较正常组显著升高,且差异具有统计学意义（P<0.05）,余同。2.化湿定痛汤对KOA大鼠膝关节直径的影响空白组大鼠患肢始终无显著改变,无紫红色斑。造模组大鼠患肢膝关节造模后第7天较空白组有不同程度的肿胀及紫红色斑,且关节直径较空白组显著增加,差异具有统计学意义。给药后第28天,与模型组相比,化湿组和mek抑制剂组大鼠膝关节直径均显著减小,差异具有统计学意义。3.化湿定痛汤对KOA大鼠软骨T2值的影响与空白组相比,模型组大鼠软骨面T2值较低,差异具有统计学意义,说明模型大鼠软骨受损严重。化湿定痛汤组软骨面T2值较模型组低,说明药物能促进大鼠软骨面修复。4.化湿定痛汤对KOA大鼠关节滑膜病理形态的影响空白组大鼠关节滑膜组织中滑膜衬里细胞层较薄且排列规则,滑膜衬里细胞下脂肪细胞丰富,血管增生及炎症细胞浸润较少。模型组滑膜衬里细胞层增生显著,衬里细胞下脂肪细胞显著减少,炎症细胞浸润明显,细胞排列杂乱无章,有明显的血管增生。化湿定痛汤组、Mek抑制剂组滑膜衬里细胞层较模型组均较薄,两组炎症细胞均显示散在浸润,且较模型组有所好转,衬里细胞下脂肪细胞较模型组较多,血管增生较模型组有所改善。5.化湿定痛汤对KOA大鼠关节滑膜中Ras、Raf、Mek、Erk m RNA表达的影响模型组大鼠滑膜中Ras、Raf、Mek、Erk m RNA表达水平较空白组显著升高;与模型组相比,化湿定痛汤组和Mek抑制剂组中Ras、Raf、Mek、Erk m RNA表达显著降低,差异具有统计学意义。6.化湿定痛汤对KOA大鼠关节滑膜中Ras、Raf、p-Mek、p-Erk蛋白表达的影响与空白组相比,模型组大鼠滑膜中Ras、Raf、p-Mek、p-Erk蛋白表达明显升高;与模型组相比,化湿定痛汤组和Mek抑制剂组大鼠滑膜中Ras、Raf、p-Mek、p-Erk蛋白表达显著降低。7.化湿定痛汤对KOA大鼠血清中IL-1β、IL-18含量的影响模型组大鼠血清中IL-1β、IL-18含量明显高于空白组;与模型组相比,化湿定痛汤组和mek抑制剂大鼠血清中IL-1β、IL-18表达显著降低。结论1.化湿定痛汤能改善KOA大鼠滑膜组织的炎症;2.化湿定痛汤治疗KOA的作用机制与其调控Ras/Raf/Mek/Erk通路相关因子的表达有关。