论文部分内容阅读
角鲨烯是高度不饱和的直链三萜类化合物,具有多种生物活性。作为性能优良的血液输氧剂,极具研究开发前景。本文首先建立了角鲨烯的高效液相色谱分析方法,经验证,方法准确有效,测得原料(大豆油脱臭馏出物)中角鲨烯含量为1.92%;其次利用NaOH-乙醇对大豆油脱臭馏出物进行皂化处理,用正己烷萃取,得到含角鲨烯5.58%的不皂化物,回收率为92.02%;然后以不皂化物为原料,经过银离子络合萃取和柱层析将角鲨烯富集至94.16%。最后根据角鲨烯在体外和体内携氧效力的研究,研制出具有提高缺氧耐受力功效的角鲨烯软胶囊产品,为改善人们的生活质量和寻求红景天的替代品提供科学依据。具体研究成果如下:(1)建立了角鲨烯的HPLC分析方法,具体色谱条件为:C18色谱柱,流动相为甲醇-水(90∶10,v/v)作为A相和异丙醇作为B相(A∶B=80∶20),流速:1.0 ml/min,进样量:10μL。在此条件下,角鲨烯保留时间为18.528 min,出峰时间比现有方法提前了近8 min。确定了皂化的最佳工艺条件:反应时间50min,反应温度70℃,碱浓度1 mol/L,料液比为1:3,角鲨烯浓度为5.58%,提取率为92.02%。(2)采用银离子络合萃取和柱层析结合的方法分离纯化角鲨烯。首先依据Box-Benhnken的中心组合设计原理优化出银离子络合萃取的工艺条件为甲醇体积分数60%(v/v),萃取温度0℃,萃取时间8 h,AgNO3浓度1.5 mol/L,角鲨烯投料比4:1,反萃时间60 min,反萃取温度65℃。角鲨烯浓度富集至46.52%,回收率为77.27%。然后以硅胶作为固定相,正己烷为洗脱溶剂,考察洗脱速度和上样量等因素对层析效果的影响。确定柱层析纯化角鲨烯的最佳工艺为:上样量与硅胶的比例为1∶20,流速为15 ml/min。取各组馏分蒸干,可得角鲨烯浸膏,纯度为94.16%,回收率为96.13%。(3)自主设计并制作了角鲨烯的体外携氧检测装置,讨论了携氧—释氧动力学变化过程,并通过小鼠体内耐缺氧实验,确定其携氧饱和剂量为60mg/10g·bw。以浸膏粉为原料,确定软胶囊内容物的配方(1000粒)为:原料:角鲨烯提取物700 g(纯度94.16%);辅料:大豆油1400 g、蜂蜡84 g、聚甘油酯7 g。试验表明本产品能明显提高缺氧耐受力。