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目的甲基-p-环糊精(MCD)去除抗原提呈细胞脂质筏内胆固醇可抑制抗原提呈和T细胞激活,然而介导细胞胆固醇流出的高密度脂蛋白(HDL)和载脂蛋白AI (apoAI)是否具有相似作用尚不清楚。方法用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激骨髓来源的树突状细胞成熟。然后将抗原负载的成熟树突状细胞与HDL和apoAI共同孵育,检测细胞抗原提呈能力的变化,并测定HDL和apoAI对脂质筏内胆固醇含量的影响。通过激光共聚焦显微镜进一步观察HDL和apoAI对脂质筏内MHCⅡ类分子蛋白含量的影响。结果Ox-LDL可以将骨髓来源的未成熟树突状细胞诱导为成熟的树突状细胞。将抗原负载的树突状细胞与HDL和apoAI共同孵育后,树突状细胞的抗原提呈和T细胞激活能力降低。并且该降低程度与HDL和apoAI介导的细胞胆固醇流出的增加程度相平行。给予HDL和apoAI孵育后的树突状细胞补充胆固醇可以恢复其抗原提呈和T细胞激活能力。分离树突状细胞脂质筏,结果表明HDL和apoAI降低细胞脂质筏内胆固醇含量。并通过激光共聚焦显微镜证实HDL和apoAI减少细胞脂质筏内MHCⅡ类分子蛋白含量。结论HDL和apoAI通过介导树突状细胞胆固醇流出,破坏细胞膜脂质筏,从而抑制细胞MHCⅡ类分子抗原提呈。目的ApoAI通过细胞跨膜蛋白ABCA1介导,接受来自细胞的胆固醇和磷脂,形成新生HDL。但是,这一过程分子水平的机制至今仍然不清楚,本研究旨在阐明ABCA1介导的由apoAI形成新生HDL的机制。方法将野生型(WT) ABCA1及来源于丹吉尔病的变异型ABCA1(W590S和C1477R)稳定转染至HEK293细胞。检测不同转染细胞系的apoAI结合能力,将胞膜内面脂质转移至胞膜外面的能力,以及胆固醇流出至apoAI和牛磺胆酸钠(NaTC)的能力。用监测蛋白解折叠和脂化状态的荧光分子标记apoAI,所得标记蛋白分别称作apoAI解折叠标记物和apoAI脂化标记物,用以检测apoAI自身蛋白解折叠和脂化状态。结果与未转染细胞相比,转染WT和W590SABCA1的细胞与apoAI结合能力增加,而转染WT和C1477R ABCA1的细胞与未转染细胞相比,其将脂质从胞膜内面转移至胞膜外面的能力增加。说明这两个基因突变型分别缺失了ABCA1的两个不同且相互独立的功能。在胆固醇流出实验中,稳定转染W590S ABCA1和C1477R ABCA1的两个细胞系对apoAI的胆固醇流出能力均降低约50%,说明ABCA1的这两个不同的功能对于胆固醇流出的能力都是不可或缺的,而且只有同时兼具两个功能才能使细胞胆固醇流出达到最大效率。在非细胞实验中,用apoAI和DMPC脂质体组建重组高密度脂蛋白(rHDL), apoAI荧光标记物表明随着rHDL的形成,apoAI蛋白处于解折叠和被脂化状态。在细胞实验中,WT和这两个变异型ABCA1的细胞表面均出现apoAI蛋白解折叠现象,而未转染ABCA1的细胞则无apoAI蛋白解折叠。但是,apoAI蛋白脂化现象没有在表达ABCA1的细胞表面观察到。不过在用apoAI脂化标记物与表达ABCA1的细胞孵育24小时后,在培基中可测到被脂化的apoAI,为细胞表面解离下来的新生HDL。结论ApoAI结合能力和胞膜脂质转移能力是ABCA1的两个不同且相互独立的功能,并且都可以使apoAI在细胞表面解折叠,然后脂化形成新生HDL。依据本研究结果,我们提出生成新生HDL的四步模型：1) ABCA1使脂质从胞膜内面转移至胞膜外面,2)ABCA1与apoAI结合,3)使细胞表面的apoAI解折叠,4)脂化的apoAI从细胞表面释放,形成新生HDL。