向日葵锈病菌的种内群体分化及SCAR标记

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:qiuxuefalv
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本研究对中国北方向日葵主产区的向日葵锈菌进行了生理小种鉴定研究,对2010年7-9月份在黑龙江、内蒙古东部、中部、西部、河北、陕西、宁夏、新疆等地采集有典型锈病症状的病叶,收集病叶上的菌样夏孢子,经接种人工寄主黑大片,进行单孢子堆分离扩繁获得44个纯化菌系。利用三联密码系统命名法,将诸菌系接种于9个鉴别寄主:S37、CM90、CM29、P-386、HARl、HAR2、HAR3、HAR4、 HAR5,经15~20天后反应型稳定,记载反应型级别,确定了6个生理小种:300、310、500、724、735、737;出现频率分别为59%、16%、14%、7%、2%、2%,结果显示300号小种为主要优势小种;将优势小种300接种于选取自各主要产区的44个代表性向日葵品种,得到感病品种12个,抗病品种31个,其中油葵品种中感病的占15%左右,食葵品种中感病的占39%,杂交种品种中感病的占31.6%,常规品种中感病的占80%。运用RAPD技术对44份菌样进行遗传多样性检测,从100条随机引物中筛选出13个多态性高、稳定性好的引物,对每个样品的基因组DNA进行扩增,共获得115个RAPD位点,其中多态位点91个,多态率为79.1%,RAPD产物分子量约在200bp-1700bp之间,用NTSYS-pc软件中的UPGMA方法计算遗传相似系数并作聚类图分析,结果显示菌样间遗传相似系数在0.63-1.00之间,平均值为0.815,表明菌样间具有丰富的遗传多样性;数据显示在0.74遗传相似系数下,供试菌样可分为3个RAPD群,表明菌样致病性与菌样地理来源并不具有一定的相关性。通过对我国44个菌样的RAPD规模筛选,发现S8引物(ACGGATCCTG)可扩增出主要优势小种300号的长度为305bp的特异片段,对特异性片段进行回收、克隆、测序,用SeqMan软件对测序结果进行整合,再用DNAMAN软件设计一对SCAR特异性引物,合成后对不同来源的300号小种进行SCAR检测,结果显示该专化SCAR标记可适用于300号小种的检测。
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