目的：1.建立1型糖尿病兔模型；2.体外培养获得兔皮肤成纤维细胞并鉴定；3.用本实验创制的诱导剂诱导兔皮肤成纤维细胞重编程为多能干细胞并进行鉴定；4.DAPI标记的诱导性自体多能干细胞移植治疗1型糖尿病兔,通过多种方法对诱导性多能干细胞疗效进行综合评价。方法：1.选普通级健康实验兔35只,将动物按随机数字表分为两组。正常对照组(n=10)：不做任何处理的健康家兔；糖尿病模型组(n=20)：注射四氧嘧啶造模。再将糖尿病模型组分为两组：治疗组(n=10)：该模型动物进行自体干细胞移植；模型对照组(n=10)：不做任何处理。2.皮肤成纤维细胞的培养及鉴定：取兔皮肤组织,采用组织贴壁法和常规培养法进行培养。采用细胞形态观察、波形蛋白免疫细胞化学染色、透射电镜及流式细胞术对成纤维细胞进行鉴定及定量分析。3.采用实验室自制的诱导剂,将成纤维细胞诱导为诱导性多能干细胞,并采用免疫细胞化学染色、半定量PCR检测、流式细胞术,对其表型进行鉴定。4.使用DAPI标记诱导性多能干细胞,自体移植治疗1型糖尿病兔,并评价疗效：测定正常对照组、模型对照组、治疗组实验兔血糖、血浆胰岛素及血浆C肽；通过病理组织切片、透射电镜、冰冻组织切片,观察胰腺结构、功能的改善及细胞的分布情况。结果：1.用于建模的家兔为25只,其中有3只死亡,其余血糖都达到1型糖尿病模型标准及建模后血糖持续稳定,建模成功率为92%。2.成纤维细胞鉴定形态学观察：原代皮肤成纤维细胞培养0.5-1h开始贴壁,1-2d为梭形,形成大小不一的集落,培养3-4d能达到80%细胞融合,传代时能均匀分布。细胞免疫化学染色：阳性细胞胞浆呈棕色着色。透射电镜：成纤维细胞扁平、体积较小、呈梭形、突起少；胞核小、呈扁卵圆形、着色深：胞质内粗面内质网等细胞器不发达。流式细胞术：成纤维细胞波形蛋白表达阳性率为100%,CK-19表达为4.5%。3.成纤维细胞诱导及鉴定免疫化学染色：诱导后的成纤维细胞Oct-4有阳性表达。流式细胞术：SSEA-4、 C-Myc、 Oct4、 Nanog阳性表达分别为5.48%、6.10%、6.09%、4.01%。PCR检测：Oct4、Nanog在诱导72h成纤维细胞内的相对表达量分别为2.3175、0.4071。4.细胞回输后第4w,诱导性细胞移植后对1型糖尿病兔疗效进行评价。血糖：治疗组低于模型对照组(P<0.05),治疗组及模型对照组均明显高于正常对照组(P<0.05)。血浆胰岛素及血浆C肽：治疗组较模型对照组则显著增加(P<0.05),模型对照组与治疗组均明显低于正常对照组(P<0.05)。病理组织切片：正常对照组胰岛丰富、多为圆形或椭圆形、形态完整；治疗组与正常对照组比较,胰岛数目少、形态欠完整、体积较小、多数位于导管附近；模型对照组胰岛数目较少、胰岛萎缩、结构被破坏、形态不规则、边缘不整齐、导管附近胰岛不多。透射电镜：正常对照组胰岛β细胞核仁明显,细胞体积较大,胞浆丰富,粗面内质网发达,胞浆内见大量分泌颗粒；治疗组可见散在胰岛,胰岛β细胞核呈椭圆形,略不规则,边聚胞质中有大量分泌颗粒,接近正常；模型对照组胰岛β细胞萎缩,体积较小,胞浆内分泌颗粒明显减少或消失。5.细胞移植后分布情况：治疗组胰腺组织中可见蓝色荧光细胞,模型对照组未见蓝色荧光细胞分布。结论：1.建立了四氧嘧啶诱导的兔糖尿病模型制作方法,其建模成功率高,死亡率低。2.采用组织贴壁培养法培养皮肤细胞可获得成纤维细胞。3.成功将成纤维细胞标记上DAP I,标记率为99-100%。4.采用实验室自制的诱导剂将兔皮肤成纤维细胞诱导为多能干细胞。5.DAPI标记的诱导性多能干细胞移植后在胰腺组织有分布并能降低糖尿病兔的血糖浓度,改善胰岛结构与功能,对受损伤的胰腺有修复作用。