论文部分内容阅读
目的：了解亮氨酸拉链转录因子样1(leucine zipper transcription factor-like1, LZTFL1)在胃癌组织和细胞系中的表达水平和启动子甲基化情况,研究LZTFL1表达水平对胃癌增殖和迁移能力的影响,阐明LZTFL1在胃癌中表达调控机制。方法：1.通过免疫组织化学的方法检测30例胃癌患者组织标本胃癌组织和正常胃粘膜组织中LZTFL1蛋白的表达水平；通过实时定量RT-PCR和Western Blotting分别检测4种胃癌细胞株(AGS. MKN28, MKN45和BGC823)以及正常胃粘膜上皮细胞株GES-1,的LZTFL1mRNA的表达水平及LZTFL1蛋白表达水平。2.通过质粒瞬时转染方法在胃癌细胞株AGS中过表达LZTFL1,通过MTS、流式细胞术和transwell等实验技术来分析LZTFLl基因表达增加后对胃癌细胞增殖能力和迁移能力的影响。3.应用LZTFL1特异性的siRNA,在正常胃粘膜上皮细胞株GES-1中敲低LZTFL1基因的表达,通过MTS、流式细胞术和transwell等实验技术来分析LZTFL1基因表达减少后对胃粘膜细胞增殖能力和迁移能力的影响。4.在胃癌细胞株AGS中敲低转录因子YYl以及在GES-1中过表达YY1后,通过实时定量RT-PCR和Western Blotting的方法检测LZTFL1mRNA和蛋白表达水平的变化。5.对LZTFL1基因的启动子(promoter)区进行分析,通过染色质免疫共沉淀(Chromatin immune-coprecipitation, CHIP)实验检测转录因子YY1对LZTFL1启动子区的调控作用。6.通过亚硫酸氢盐硫化测序(Bisulfite Genomic Sequencing, BGS)和亚硫酸氢盐甲基化特异性PCR (Methylation specific PCR,MSP)的方法检测LZTFL1启动子区甲基化的情况。在胃癌细胞株AGS中使用甲基化抑制剂Aza,检测使用Aza后LZTFL1基因表达变化情况。结果：1. LZTFL1蛋白在胃癌组织中的表达水平明显低于正常胃粘膜。2.在胃癌细胞株中,LZTFL1基因的mRNA和蛋白水平均为低表达水平,而在正常胃粘膜上皮细胞株GES-1中则表现为高表达。3.增加LZTFL1基因表达能抑制胃癌细胞的增殖、促进凋亡,并且在一定程度上抑制胃癌细胞的迁移,反之降低LZTFL1基因表达能促进胃癌细胞的增殖和迁移。4.YY1过表达能抑制LZTFL1基因在mRNA和蛋白水平的表达,敲低YY1后,LZTFL1基因在mRNA和蛋白水平均有所上升。5.YY1通过对LZTFL1基因的启动子区的直接结合作用,抑制LZTFL1基因的转录表达。6.胃癌细胞株AGS中LZTFL1基因的启动子区处于高甲基化状态,经过Aza去甲基化处理后,LZTFL1基因表达发生上调。结论：1. LZTFL1基因在胃癌组织水平和胃癌细胞水平均表现为低表达,增加LZTFL1基因的表达能抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力,敲低LZTFL1基因表达将增加细胞的增殖和迁移能力。2.转录因子YY1通过对LZTFL1基因的启动子区的直接作用,阻碍LZTFL1基因的表达。3.胃癌中LZTFL1的低表达和其启动子区域的高甲基化状态有关。