提高黄芪中有效成分的提取方法研究

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目的:本研究以黄芪中黄芪甲苷、黄芪总皂苷及黄芪多糖这三种主要药效成分为考察指标,探索提高黄芪药材中有效成分提取率的最佳方法。方法:1.建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)测定黄芪甲苷香草醛-浓硫酸比色法测定黄芪总皂苷和苯酚-浓硫酸法测定黄芪多糖的三种含量测定方法。2.采用NaOH溶液对黄芪药材的提取液进行水解,通过单因素考察及正交试验设计确定碱水解法提高黄芪提取液中黄芪甲苷含量的最佳工艺条件。3.以黄芪总皂苷和黄芪多糖为指标,通过对不同提取方法的比较,确定黄芪药材的最佳提取方法。4.比较AB-8型和D101型两种大孔吸附树脂对黄芪总皂苷的纯化效果,并对优选的树脂进行纯化工艺参数的考察。5.比较纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶和果胶酶这四种酶对黄芪总皂苷及黄芪多糖提取得率的影响,选择效果最佳的酶进行单因素考察及正交试验设计,应用综合评分法确定最佳的酶辅助提取工艺,并考察酶解辅助提取是否对黄芪主要药效成分的结构产生影响。结果:1.建立了准确、稳定、可靠的黄芪中黄苠甲苷、总皂苷及多糖的含量测定方法。2.碱水解法提高黄芪提取液中黄芪甲苷含量的最佳工艺:NaOH的质量分数为0.4%,室温静置水解2h,黄芪药材与碱溶液的料液配比为1:12,水解后提取液中黄芪甲苷的含量约是水解前的16.4倍。3.黄芪总皂苷的提取工艺:70%乙醇90℃回流提取3次,每次1h,加醇量分别为黄芪药材干重的10,8,8倍;挥干上述黄芪药渣中的乙醇,加入蒸馏水回流提取3次,每次1h,加水量分别为黄芪药材干重的10,8,8倍,进行黄芪多糖的提取。该提取方法相对于2005版《中国药典》法,黄芪总皂苷的提取率达97.05%。4.D101型大孔吸附树脂对黄芪总皂苷的纯化效果好,最佳条件:浓度为0.5g·mL-1黄芪药材提取液,以1.0mL·min-1的流速通过D101型大孔吸附树脂柱吸附后,用3BV蒸馏水洗去未吸附成分,再用5BV70%EtOH洗脱树脂柱,收集浓缩70%乙醇洗脱液后减压干燥得黄芪粗皂苷粉末,此法所制备的黄芪总皂苷纯度平均达83.44%。5.选择纤维素酶辅助提取黄芪药材中有效组分,最佳的酶解工艺:酶解液pH值为4.5,酶用量占药材量的1.0%,酶解温度55℃,酶解时间2.5h,黄芪药材经酶解后比对照组提取的黄芪总皂苷的含量提高了27.26%,黄芪多糖含量提高了40.91%。对酶解和未经酶解提取的黄芪多糖、黄芪总皂苷及黄芪黄酮三种成分进行分析,初步判断酶辅助提取对黄芪中有效成分的化学组成无明显影响。结论:本研究所建立的黄芪甲昔、黄芪总皂苷及黄芪多糖的含量测定方法,简单、准确,能够用于黄芪药材及金芪降糖片的质量控制。应用碱水解法提高黄芪提取液中黄芪甲苷的含量,简便易行,转化率较高,为黄芪甲苷单体制剂的开发以及提高黄芪复方制剂的质量提供了研究依据,具有较高的实用价值。酶辅助提取可以提高黄芪等根茎类药材中有效成分的浸出率,减少耗能,降低成本,不需要特殊的设备,有利于在生产中实施,为黄芪药材的进一步开发利用提供了试验依据。
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