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第一部分 MyoD基因重组腺病毒载体的构建 目的：构建MyoD基因重组腺病毒载体，为研究MyoD基因对心肌损伤的修复作用提供实验基础。方法：从pEMSV-MyoD质粒上用PCR方法扩增出MyoD cDNA片段，并使MyoD基因加上CACC序列接头，经过定向拓扑克隆使目的基因连接到转移载体上，测序验证后用LR酶促反应将目的基因转移到腺病毒表达载体DNA上，获得MyoD基因重组的腺病毒DNA，转染HEK293A细胞，包装、扩增MyoD基因重组的腺病毒，测定病毒滴度，并对此病毒进行PCR鉴定。结果：经PCR鉴定和DNA测序证实MyoD基因重组腺病毒含大小正确的目的片段，其DNA序列正确。病毒滴度为1.3-4.8×1011pfu／ml。结论：成功构建了MyoD基因重组腺病毒载体。 第二部分 MyoD基因诱导体外培养大鼠心肌成纤维细胞向骨骼肌成肌细胞分化的实验研究 第一节 大鼠心室成纤维细胞的分离、培养 目的：探讨大鼠心室成纤维细胞分离、培养的方法。方法：无菌条件下剪取SD大鼠乳鼠心室肌，采用胰酶消化的方法获取心室肌细胞，差速贴壁法分离心室成纤维细胞，进行体外培养、扩增，观察所培养细胞的形态，并用免疫细胞化学方法检测波形蛋白、纤维连接蛋白和平滑肌肌动蛋白的表达。结果：心室成纤维细胞在体外生长、增殖良好，生长迅速。刚分离出的心室成纤维细胞呈类圆形、三角形或多角形；24h-48h细胞体积增大，呈三角形、梭形或多角形；72h即呈融