猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是近二十年来世界范围内造成养猪业重大经济损失的猪病之一,其病原是PRRS病毒(PRRSV),主要感染巨噬细胞,造成机体免疫抑制。本研究着重于分析高致病性PRRSV(HP-PRRSV)分离株(HuN4)及其传代致弱的疫苗株(HuN4-F112)感染后引起的骨髓源巨噬细胞的分化差异,进一步探究强毒、疫苗株引起的免疫反应机制。本研究首先通过体内实验接种了HP-PRRSV HuN4及其传代致弱的疫苗株HuN4-F112,结果显示,强毒感染后猪群短时间内发热,且在10天之内全部死亡,而疫苗株感染后没有引起任何临床反应,并能产生较好的保护效应。随后通过对全血进行流式细胞术检测来探究强弱毒引起的体内免疫调节差异,可以看到弱毒感染后T淋巴细胞群数量明显增高,而强毒感染导致CD3~+T淋巴细胞群数量下降,但髓源单核细胞群的数量显著性上升。结合相关因子mRNA水平的定量检测,强毒感染后能促进巨噬细胞活化的M-CSF表达量升高,并且CD163受体提升,抗原递呈分子水平减弱,显示强毒引起的单核细胞数量变化可能主要与巨噬细胞相关。由于猪源巨噬细胞缺乏对功能不同亚型进行鉴定的表型基因,本研究在体外进行了骨髓源巨噬细胞的分离及极化,具体步骤为从猪的股骨及胫骨取得骨髓细胞经M-CSF活化形成M0型巨噬细胞,M0型巨噬细胞进一步由LPS/IFN-γ刺激分化形成M1型巨噬细胞,而M2型巨噬细胞则在IL-4等Th2相关因子的刺激下形成。通过显微镜可以观察到分化后的巨噬细胞相较于M0型形态更大且颗粒状更明显,并且都有较强的吞噬作用,证明了分离到的巨噬细胞纯度较好,且与M1型巨噬细胞相比M2形态特点表现在其长有小的触角及伪足。随后,对体外分化的巨噬细胞亚型进行转录组水平上的测序,分析得到的M1、M2亚型特异性表达基因通过荧光定量和Western blot进一步鉴定基因表达情况。结果发现,IDO1及STX11在分化成熟的M1型巨噬细胞中上调表达,而M2型巨噬细胞的TP53INP1及GK基因表达量相对有所提升。因此,将IDO1、STX11以及TP53INP1、GK分别作为M1和M2型巨噬细胞的生物标记分子,为后续试验建立基础。借助前期鉴定的M1、M2亚型marker,对PRRSV强、弱毒株引起的骨髓源巨噬细胞分化差异进行分析,发现强毒HuN4在感染M0型巨噬细胞后IDO1及STX11在蛋白和mRNA水平均显著性上升,且TP53INP1和GK表达水平下降,而疫苗株感染后IDO1及STX11仅在mRNA分子水平上有上升。与此同时,在对体外分化的M1和M2巨噬细胞亚型进行PRRSV感染时,病毒滴度、免疫荧光及Western blot结果都显示,相较于疫苗株F112,HuN4的复制能力更强,且结合流式细胞术对PRRSV感染后巨噬细胞功能进行鉴定,发现HuN4感染能抑制巨噬细胞的吞噬及抗原递呈能力,进而影响T淋巴细胞免疫反应。本研究为解释HuN4致病机制及疫苗株F112保护机制提供基础,并提出借助调节体内巨噬细胞分化状态调控机体免疫应答的实验思路。