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一、背景[二-(4-氯苯甲酰异羟肟酸)二正丁基合锡](DBDCT)是一种新型的抗肿瘤化合物,课题组前期对DBDCT体内代谢与药动学研究表明：DBDCT在大鼠体内吸收迅速、良好并广泛代谢,在尿液和粪便均未检测到原形药物,进入机体的DBDCT可能主要经肝微粒体酶代谢转化,大部分经肾或胆汁排出。二、目的本论文拟采用大鼠肝微粒体体外孵育实验,系统研究DBDCT在大鼠肝微粒体内的代谢情况,确定细胞色素P450 (CYP450)在DBDCT代谢中的作用,阐明DBDCT对大鼠CYP450的影响,为理解该药代谢的机制、预测药物相互作用和药物代谢多态性以及指导临床合理用药提供依据。三、方法采用差速离心法制备了大鼠的肝微粒体,用紫外可见分光光度法测定肝微粒体蛋白浓度及细胞色素P450含量,建立了测定大鼠肝微粒体样品中DBDCT浓度的HPLC法和大鼠肝微粒体体外代谢研究模型。以DBDCT为底物研究了该药在大鼠肝微粒体中的代谢行为；为了鉴定参与DBDCT代谢的CYP450同工酶,考察了CYP450专属性诱导剂和抑制剂对该反应的影响；分别以非那西丁、双氯芬酸钠、奥美拉唑和硝苯地平为底物评价大鼠CYP1A、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4的活性,以考察DBDCT对大鼠CYP450的作用。四、结果对大鼠肝微粒体进行诱导,测定肝微粒体蛋白浓度及细胞色素P450含量,各诱导组与空白组比较,含量均有显著性差异。建立了测定大鼠肝微粒体样品中DBDCT浓度的HPLC法,本法线性范围为3.48-174.20μmol·L-1,最低定量浓度为3.48μmol·L-1,检测限为0.73μmol·L-1,方法简便、快速、准确、重现性好,可适用于DBDCT的体外代谢研究。根据Michaelis-Menten方程和Eadie-Hofstee制图法求得最大反应速率(即纵轴的截距)Vmax=2.813μmol·(min·mg)-1,米氏常数(即直线斜率)Km=159.07μmol·L-1和肝清除率Clin=Vmax／Km=0.017L·(minmg)-1。DBDCT在不同酶源中的体外代谢结果提示：PB、DEX诱导组和空白对照组比较有显著性差异,而BNF组和空白对照组无明显差异；将DBDCT分别于各种CYP亚型的专属抑制剂体外共孵育,以确证介导DBDCT代谢的主要酶系,结果显示酮康唑对DBDCT的代谢有较强的抑制作用；此外,磺胺甲(?)唑对DBDCT的代谢也有一定的抑制,而氟伏沙明、甲氧苄氨嘧啶和奥美拉唑对DBDCT的代谢抑制作用较弱；底物试验中,硝苯地平在DBDCT处理过的鼠肝微粒体中代谢明显减弱,与空白组有明显差异(P<0.01,P<0.001),非那西丁、双氯芬酸钠和奥美拉唑在空白和DBDCT处理过的鼠肝微粒体中代谢无明显差异(P>0.05)。五、结论DBDCT在大鼠肝微粒体中代谢较快,提示该药可能肝首过效应较强。通过DBDCT在不同酶源中的体外代谢试验和代谢抑制试验证明CYP3A4在催化DBDCT代谢中起了主导作用,CYP2C9可能部分参与,而CYP1A对DBDCT的代谢无明显催化作用；底物试验结果说明DBDCT对CYP3A4有明显的抑制作用而对CYP1A、CYP2C9和CYP2C19均无明显影响。