油茶(Camellia oleifera)是我国重要的、特有的木本食用油料树种,在我国秦岭-淮河以南地区广泛分布。炭疽病、叶枯病等是油茶的常见病害,严重制约着油茶产业的发展。目前,主要采用化学农药防治油茶病害,但是化学农药的大量使用,不仅会使油茶病害致病菌产生抗药性,而且污染环境、对人体有害。微生物菌剂防治植物病害具有优质高效、低毒低残留、对环境安全等特点,利用微生物防治油茶病害是实现油茶病害绿色可持续性控制的有效措施。为筛选出新的生防菌种资源,以油茶炭疽病的病原菌为指示菌,分离油茶健康叶片中的内生拮抗细菌并研究其抑菌特性,以期为开发微生物农药提供新的菌种资源。本研究从健康油茶叶片中分离筛选拮抗菌,并选择了效果最佳的菌株,对其进行了菌种鉴定、发酵培养基优化和抑菌活性测定,结合本实验室已有的生防研究基础,科学选出优质高效、可复配的拮抗菌株,最后进行复合型微生物菌剂水分散粒剂的制作和田间防效试验。本研究取得结果如下:1.本试验筛选得到5株具有稳定拮抗效果的菌株,以具有拮抗作用最佳的细菌HBMC-B05作为进一步研究的对象,通过菌落及细胞形态观察、部分生理生化特性以及16S rDNA基因和gyrA基因序列综合分析进行菌种鉴定,结果表明该菌为贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis。2.通过单因素试验确定了B.velezensis HBMC-B05菌株最优基础培养基为YSP培养基,最佳碳源是蔗糖,最佳氮源是胰蛋白胨和酵母提取物;响应面法分析后结果显示该菌株的最优发酵培养基为:蔗糖20.12 g/L,胰蛋白胨9.96 g/L,酵母提取物5.2 g/L和硫酸镁2.22 g/L;在控制单一发酵培养条件的情况下,最适培养温度为28℃,最适培养基初始pH为7.0,最适摇床转速为180 r/min。3.抑菌试验表明B.velezensis HBMC-B05对油茶炭疽病的主要致病菌抑菌效果均可达到70%以上,其中对果生炭疽菌Colletotrichum fructicola的抑菌率最佳,可达到81.31%,对油茶的其它4种致病菌也具有良好的抑菌效果。进一步探究了 HBMC-B05发酵液对果生炭疽菌C.fructicola的菌丝生长和孢子萌发的影响,试验结果表明该发酵液对C.fructicola的菌丝生长和孢子萌发都有很大影响,具体表现为:菌丝体出现膨大,菌丝分枝减少、畸形、顶端膨大的现象,而且仅能观察到极其少量的孢子,明显阻碍了菌落的正常形成,而对照组中的菌丝则可以正常产孢,正常形成浓密菌丝的菌落;孢子萌发出现不同程度畸形,芽管整体膨大,出现异常分枝,孢子萌发数量较少。根据实验室前期对油茶病害生物防治的研究基础,选择了对油茶病害具有良好生物防效,且也是油茶内生菌的枯草芽胞杆菌Y13作为目标复配菌株,通过试验表明两者复配防效大于单一菌株防效,且两者具有亲和性,因此将Y13与HBMC-B05形成BY10复合菌。4.复合型微生物菌剂的剂型选择是水分散粒剂,主要研究了 BY10复合菌水分散粒剂的载体、润湿剂、分散剂、崩解剂和粘结剂的筛选及最佳使用量,通过利用单因子试验和正交试验进行了筛选,确定出BY10复合菌水分散粒剂的配方为:10%-90%的BY10复合菌原药、5%的润湿剂聚乙烯醇、6%的分散剂多聚磷酸钠、6%的崩解剂海藻酸钠、3%的粘结剂聚乙二醇、载体硅藻土补足至100%。田间防效试验表明该复合菌剂对油茶病害有良好的抑制效果和预防效果,其中稀释100倍的BY10复合水分散粒剂的防治效果可达59.05%。