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本课题组前期运用经典的单菌多产物发酵策略(One Strain Many Compound s,OSMAC),对毛韧革菌(Stereum hirsutum)的天然次代物进行分离,其中一些化合物结构较为新颖且有抗菌活性。为进一步探究毛韧革菌(Stereum hirsutum)的次生代谢产物能力,我们通过anti SMASH结合Inter Pro、Blast、CDD数据库,预测并选择了三个可能处于沉默或低表达状态的三个PKS(PKS1、PKS2、PKS3)进行研究。研究结果如下:1.针对三个目的基因,进行基因功能注释,完成对目的基因模序的确定与可能的产物结构以及类型的预测。通过分析PKS1与PKS2,发现两者的功能域只是相差一个ACP模块,并且两者在系统发育上比较近,它们的KS同源性达到61.8%,推测PKS1和PKS2可能参与苷色酸类代谢产物的合成。PKS3可能是非典型蘑菇聚酮合成酶,能够参与多不饱和脂肪酸类药物的生物合成。2.以p RS314和p BARGPE1-Hygro-EGFP质粒构建酿酒酵母异源表达载体p YUZ02,该载体能够在酿酒酵母中处于一个稳定的低拷贝状态,并结合内源性的强启子gpd A,以确保下游表达的PKS能够启动。3.通过TLC和LC-MS,对3个异源表达基因簇菌株的发酵产物进行检测分析。与对照组相比,TLC检测SC-p YUZ03和p YUZ04无明显差异;SC-p YUZ05碘化铋钾溶液显色出现一个明显的橘红色点;LC-MS检测三株表达菌株,SC-p YUZ03表达菌株产物基本没有差异;SC-p YUZ04表达菌株出现一个分子离子峰的增强;SC-p YUZ05表达菌株出现明显的分子离子峰,提取分析确定多出三或者四个(有一个可能为倍峰)化合物,分子离子峰分别为253、287、483、617。