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【目的】在恶性肿瘤的治疗中，将直接杀伤肿瘤细胞的化疗与激活机体免疫系统、调节肿瘤微环境的免疫治疗相结合可有效发挥协同抗肿瘤效果。临床常用的化疗药物与免疫治疗药物在理化性质和药代动力学等方面有着显著差异。本课题设计了一种肿瘤微酸环境敏感的聚乳酸共聚物(mPEG-Dlinkm-PDLLA)为核和普朗尼克F127为壳的聚合物纳米颗粒共装载紫杉醇(PTX)和白介素-12(IL-12)，实现疏水性化疗药物和亲水性免疫治疗细胞因子的共输送和肿瘤微酸环境响应性释药，充分发挥化疗免疫联合治疗癌症的潜力。
【方法】利用开环聚合法合成具pH响应基团的mPEG-Dlinkm-PDLLA共聚物。采用纳米沉降法制备pH敏感的温敏型纳米颗粒TSNPpH，并先后装载PTX和IL-12(PTX/IL-12@TSNPpH)。通过透射电镜、动态光散射等手段表征纳米粒的形貌、结构，考察纳米颗粒的稳定性、温度敏感性。通过HPLC法与ELISA法分别检测纳米粒中PTX和IL-12的装载量以及酸敏感释放特性。采用激光共聚焦显微镜考察包载荧光染料的纳米粒细胞摄取情况。通过小动物活体成像系统，研究纳米颗粒在各组织中的实时分布。以荷瘤小鼠为模型，考察载药纳米颗粒对肿瘤和肺转移的抑制效果，通过免疫组化、免疫荧光、蛋白质印迹法与流式细胞分析技术，考察联合治疗后相关指标含量变化的影响，分析其可能机制。
【结果】制备的TSNPpH纳米粒形貌规整均一、透射电镜图下显示出明显的核-壳结构。对PTX和IL-12的包封率分别达到32.7±2.6%和92.2±1.2%。酸敏感特性的纳米粒实现了肿瘤部位的富集，有效促进药物在肿瘤部位的释放。该联合治疗方案明显抑制了4T1荷瘤小鼠肿瘤的生长和转移，延长了荷瘤小鼠的整体生存时间。PTX和IL-12的联合应用可有效激活T淋巴细胞及NK细胞释放IFN-γ,选择性地抑制调节性T细胞和诱导肿瘤相关巨噬细胞向M1型分化,调节肿瘤免疫抑制性微环境。
【结论】本课题成功构建了一种酸敏感的温敏型聚合物载体，实现了同时递送化疗药物PTX和免疫治疗细胞因子IL-12用于化疗免疫联合治疗肿瘤。该纳米体系能够实现对疏水药物PTX和亲水高分子IL-12的良好包封。该联合治疗方案在三阴性乳腺癌4T1小鼠模型中展现出良好的肿瘤抑制效果。PTX与IL-12联合作用在杀伤肿瘤细胞的同时，可调节肿瘤免疫微环境，增强机体的抗肿瘤免疫应答。PTX/IL-12@TSNPpH纳米粒的构建为化疗联合免疫治疗肿瘤的载体设计提供科学证据。
【方法】利用开环聚合法合成具pH响应基团的mPEG-Dlinkm-PDLLA共聚物。采用纳米沉降法制备pH敏感的温敏型纳米颗粒TSNPpH，并先后装载PTX和IL-12(PTX/IL-12@TSNPpH)。通过透射电镜、动态光散射等手段表征纳米粒的形貌、结构，考察纳米颗粒的稳定性、温度敏感性。通过HPLC法与ELISA法分别检测纳米粒中PTX和IL-12的装载量以及酸敏感释放特性。采用激光共聚焦显微镜考察包载荧光染料的纳米粒细胞摄取情况。通过小动物活体成像系统，研究纳米颗粒在各组织中的实时分布。以荷瘤小鼠为模型，考察载药纳米颗粒对肿瘤和肺转移的抑制效果，通过免疫组化、免疫荧光、蛋白质印迹法与流式细胞分析技术，考察联合治疗后相关指标含量变化的影响，分析其可能机制。
【结果】制备的TSNPpH纳米粒形貌规整均一、透射电镜图下显示出明显的核-壳结构。对PTX和IL-12的包封率分别达到32.7±2.6%和92.2±1.2%。酸敏感特性的纳米粒实现了肿瘤部位的富集，有效促进药物在肿瘤部位的释放。该联合治疗方案明显抑制了4T1荷瘤小鼠肿瘤的生长和转移，延长了荷瘤小鼠的整体生存时间。PTX和IL-12的联合应用可有效激活T淋巴细胞及NK细胞释放IFN-γ,选择性地抑制调节性T细胞和诱导肿瘤相关巨噬细胞向M1型分化,调节肿瘤免疫抑制性微环境。
【结论】本课题成功构建了一种酸敏感的温敏型聚合物载体，实现了同时递送化疗药物PTX和免疫治疗细胞因子IL-12用于化疗免疫联合治疗肿瘤。该纳米体系能够实现对疏水药物PTX和亲水高分子IL-12的良好包封。该联合治疗方案在三阴性乳腺癌4T1小鼠模型中展现出良好的肿瘤抑制效果。PTX与IL-12联合作用在杀伤肿瘤细胞的同时，可调节肿瘤免疫微环境，增强机体的抗肿瘤免疫应答。PTX/IL-12@TSNPpH纳米粒的构建为化疗联合免疫治疗肿瘤的载体设计提供科学证据。