荧光磁性纳米粒的制备及其在生物分析中应用

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本论文就磁性纳米粒的制备及其表面功能化、荧光磁性纳米粒的构建、磁性纳米粒和荧光磁性纳米在乙肝表面抗原(HBsAg)检测中的应用作了相关研究。采用共沉淀法合成了表面富含有羟基的大小约15nm的Fe3O4磁性纳米粒,粒子形貌近似球形,具有超顺磁性,但有团聚的现象,分别用柠檬酸钠和多巴胺对制备好的Fe3O4粒子进行表面修饰,结果证明只需要0.3mol/L的柠檬酸钠就可以明显改善粒子在水中的分散性和稳定性,多巴胺修饰后的粒子表面连接有-NH2活性功能基团。采用Frens法制备平均粒径为80nm的核壳结构的Fe3O4@Au纳米粒,随着金壳的增厚,粒子在560-590nm处的表面等离子共振吸收峰不断增强,粒子磁性能良好。还采用THPC还原HAuCl4法制得4-5nm小粒径的胶体金,并进一步尝试将负电性的纳米Au吸附到DA-Fe3O4粒子表面后包覆银层,获得Fe3O4@Ag纳米粒。采用层层自组装方法制备了Fe3O4/PE5/(QD/PDAC)3荧光磁性纳米粒,改善了Fe3O4对量子点荧光淬灭作用,但其制备过程操作繁琐、耗时。又采用改进的St?ber法在Fe3O4@SiO2粒子表面吸附了量子点后再次包覆硅层制得了平均粒径约100nm的Fe3O4@SiO2/PDAC/QD@SiO2荧光磁性纳米粒,其分散稳定性和光化学稳定性良好,解决了磁性粒子对荧光物质的淬灭问题,为荧光磁性纳米粒在生物分析方面的应用提供了可能性。利用双抗体夹心原理并采用测定剩余荧光法建立HBsAg的定量分析方法,以羧基化Fe3O4磁性粒子作为磁性载体连接小鼠抗HBsAg抗体,以羧基化铕荧光纳米粒作为荧光标记物连接羊抗HBsAg抗体,该方法在0.2-1.0μg/ml线性范围内有良好的线性,其相关系数达0.9914,最低检测限为0.2μg/ml。在此基础上,初步研究了直接荧光法检测HBsAg体系,以羧基化荧光磁性粒子作为磁性载体连接小鼠抗HBsAg抗体,以羧基化铕荧光纳米粒作为荧光标记物连接羊抗HBsAg抗体,该方法在0.8-2.0μg/ml线性范围内有线性相关,灵敏度较剩余荧光法低,但有望应用于临床中乙型病毒性肝炎疾病的检测。
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