背景:创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）是神经外科常见的、具有高致死率和高致残率的中枢神经系统疾病。大量研究指出:继发性脑损伤（secondary brain injury）是造成TBI患者不良预后的重要原因。继发性脑损伤的病理生理机制复杂,包括炎症因子释放、线粒体功能障碍、神经细胞凋亡、氧化应激和胶质细胞活化等。目前临床上仍缺乏可以有效减轻继发性脑损伤和提高TBI患者生存率以及生存质量的有效药物。髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）作为衔接蛋白,在TBI后炎性反应及细胞凋亡中被证实起着至关重要的信号转导作用。既往研究发现在TBI动物实验模型中,实验动物大脑皮层MyD88蛋白表达出现明显升高,进一步研究发现在TBI患者皮层同样发现MyD88蛋白表达明显升高,同时MyD88的表达增高伴随着下游一系列炎性反应及神经凋亡相关信号通路的激活。目前相关文献中尚无在创伤性脑损伤后干预MyD88作用研究的报道。我们推测,抑制MyD88的表达在继发性脑损伤中可能起到脑保护作用。因此,本课题使用MyD88特异性抑制剂ST2825,研究其在实验性创伤性脑损伤后作用及潜在机制。方法:本课题分别建立体内和体外TBI实验模型。在小鼠TBI体内模型中,首先运用脑水含量测定以及行为学功能评分,研究不同剂量ST2825对TBI后小鼠脑水含量和神经功能损害的影响。然后运用Western blotting技术研究ST2825对TBI后小鼠皮层MyD88蛋白表达的抑制作用。接下来运用蛋白免疫印迹实验研究ST2825对于MyD88下游因子TAK1和NF-κ B表达变化的影响。接着运用酶联免疫吸附试验研究ST2825对于TBI后小鼠皮层炎性因子TNF-α和IL-1β表达影响。为了研究ST2825对于TBI后小鼠皮层胶质细胞激活的影响,我们用蛋白免疫印迹实验检测了 Iba-1蛋白表达的变化。然后用Western blotting实验研究了ST2825对于血脑屏障相关紧密连接分子ZO-1蛋白的影响,以及ST2825对于凋亡相关因子Caspase-3表达影响。最后我们采用TUNEL免疫组化实验以及尼氏染色来确定抑制MyD88对于TBI后神经细胞凋亡和神经元细胞形态学的影响。TBI体外实验部分,我们运用Western blotting实验研究了 ST2825对于神经元细胞划伤后MyD88蛋白表达的变化影响,以及下游TAK1和NF-κB信号分子蛋白表达的影响。然后运用NeuN和p65免疫荧光双标实验确定ST2825对于神经元细胞损伤后NF-κB主要亚单位p65分布变化的影响。然后用酶联免疫吸附试验研究炎症相关因子TNF-α和IL-1β表达的变化。接着运用流式细胞术研究ST2825对于划伤后神经元细胞凋亡的影响。最后用台盼蓝染色和乳酸脱氢酶释放测定实验研究ST2825对于划伤后神经元细胞保护作用的研究。结果:体内体外实验结果均表明:ST2825在TBI后可以明确抑制MyD88蛋白表达,同时抑制MyD88下游信号分子的表达及信号转导。TBI后使用ST2825抑制MyD88表达可以显著降低炎性因子TNF-α和IL-1β的蛋白水平,并显著抑制TBI小鼠皮层小胶质细胞的活化。提示ST2825可能通过抑制炎性反应来提供脑保护作用。进一步研究发现,抑制MyD88表达引起神经细胞凋亡减少,损伤减轻。体内实验同时发现,抑制MyD88表达可以显著减轻TBI后小鼠脑水肿和神经功能障碍。结论:本课题通过体内体外实验证实:使用MyD88特异性抑制剂ST285可以明确抑制TBI后MyD88表达以及下游信号分子的转导。同时ST2825可以减轻TBI后炎性反应和细胞凋亡。本课题的发现有助于寻找创伤性脑损伤后减轻继发性脑损伤的有效治疗干预靶点,提示ST2825可以通过抑制MyD88介导的信号通路来提供脑保护作用。