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目的:据《柳叶刀》报道,全世界每年超过350,000人诊断为肾细胞癌(renal cell cancer,RCC),约140,000人死于这种癌症。肾透明细胞癌(clear cell renal cell cancer,ccRCC)是RCC常见病理类型,约占所有RCC患者的60%-80%,目前对肾透明细胞癌的主要治疗方法为手术切除,其对于放、化疗均不敏感,而且大约30%的患者确诊时已发生远处转移,这明显限制了肾透明细胞癌患者的术后生存率。microRNA(miRNA)是一类高度保守的小非编码RNA,通过与靶mRNA 3’端非翻译区(3’-UTR)配对,降解靶mRNA或抑制其翻译,从而调节靶基因的表达。越来越多研究表明,mRNA 3’-UTR基因突变减弱了其与microRNA特异性结合,从而影响靶基因表达,并参与多种肿瘤的发生发展。SET8是迄今发现的唯一可特异性单甲基化H4K20的赖氨酸甲基转移酶,其在维持基因组稳定性、调节基因表达、DNA损伤修复、调控细胞周期中发挥着重要作用。已有多个研究报道SET8 mRNA 3’-UTR区miR502结合位点单核苷酸多态性与肝细胞肝癌、乳腺癌等多种肿瘤的发生和/或预后明显相关。同时有研究报道SET8蛋白在肿瘤组织的表达水平明显高于邻近非肿瘤组织,且SET8与肿瘤的预后存在紧密联系。本研究旨在探讨SET8 mRNA 3’-UTR区miR502结合位点单核苷酸多态性和SET8表达与肾透明细胞癌患者发病与预后的相关性,观察敲低内源性SET8表达对肾透明细胞癌786-O细胞生物学行为的影响。方法:1选取2006年~2010年在河北医科大学第四医院泌尿外科经术后组织病理确诊为原发性肾透明细胞癌患者110例。留取患者术前静脉血标本,准确记录所有患者的性别、年龄、临床分期、肿瘤大小、转移情况等临床特征。通过门诊复查、电话随访肾透明细胞癌患者术后的生存情况,随访期限为5年,截止时间为2015年12月。另收集2012年10月~2013年10月于河北医科大学第四医院体检的130例健康人,详细记录体检资料,并除外与肾透明细胞癌相关疾病,采集静脉血标本。2采用基因测序的方法检测miR502结合位点基因型,分析其与肾透明细胞癌发病风险及预后的相关性;免疫组织化学法检测肾透明细胞癌患者组织标本SET8蛋白表达情况及其与ccRCC患者临床病理特征及预后的关系。3体外培养肾透明细胞癌786-O细胞,将细胞分3组:(1)Control照组(未转染),(2)NS-siRNA组(转染阴性对照siRNA),(3)SET8-siRNA组(转染SET8敲低质粒)。MTT实验和克隆形成实验检测转染后786-O细胞增殖能力,划痕实验检测转染后786-O细胞迁移能力,Transwell实验检测转染后786-O细胞侵袭能力。应用qPCR和Western Blot技术检测增殖相关基因Survivin和Caspase3 mRNA和蛋白的表达,粘附分子E-cadherin mRNA和蛋白表达。结果:1 miR502结合位点单核甘酸多态性与肾透明细胞癌患者发病风险的相关性110例肾透明细胞癌患者和130例健康人之间,以CC基因型为对照,分别与CT、TT和CT+TT基因型进行比较,差异有统计学意义(P<0.05),OR值分别为3.188(95%CI=1.344~7.557)、2.912(95%CI=1.319~6.427)、3.000(95%CI=1.393~6.463)。2 miR502结合位点单核甘酸多态性与肾透明细胞癌患者发病预后的相关性性别、确诊时年龄以及miR502结合位点基因型与术后5年生存率无明显相关性(P>0.05);肿瘤分期、肿瘤直径以及是否存在淋巴结转移与术后5年生存率存在明显相关性(P<0.05)。3 miR502结合位点基因型与SET8表达的相关性及SET8蛋白表达与肾透明细胞癌患者预后的相关性(1)与CT和TT基因型进行比较,基因型为CC的患者SET8蛋白表达明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)与SET8高表达患者相比,低表达患者5年生存率更高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)Cox比例风险回归模型显示SET8蛋白、肿瘤大小、肿瘤分期均为肾透明细胞癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。4干扰SET8基因表达对肾透明细胞癌786-O细胞的影响(1)敲低SET8蛋白内源性表达后,786-O细胞增殖、侵袭和转移能力均受到抑制,凋亡增加。(2)q PCR及Western结果显示,敲低SET8蛋白内源性表达后,Survivin mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);而Caspase3、E-cadherin mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:1 SET8 miR502结合位点基因型CT、TT与肾透明细胞癌发病风险升高密切相关。2 SET8 miR502结合位点基因型CT、TT与肾透明细胞癌SET8蛋白表达水平升有关,且SET8是影响肾透明细胞癌患者术后5年预后的独立危险因素。3 SET8可能是通过调节Survivin、Caspase3和E-cadherin表达,调控肾透明细胞癌786-O细胞增殖、凋亡、侵袭和转移,进而影响肾透明细胞癌的发生发展。4分析miR502结合位点单核苷酸多态性和SET8表达有助于我们发现潜在的肾透明细胞癌患者。