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昆虫的嗅觉对其栖息地的选择、觅食、群集、繁殖以及信息传递等行为都具有重要的作用。对昆虫嗅觉机理的深入研究,是探索农业害虫专一性防治的基础,并有利于探明昆虫内在的行为机制,解释昆虫各种生命行为与寄主植物的协同进化机制,同时还可以为研发与环境兼容性好,对天敌无害的高效害虫引诱剂和趋避剂提供依据。感觉神经元膜蛋白基因(sensory neuron membrane protein,SNMP)是属于人类基因中CD36基因家族的一类,是CD36家族中唯一在神经元中发现的基因。SNMPs是位于嗅觉受体神经元上的嗅觉特异性蛋白,具有2个跨膜区域,分别位于靠近C2端和N2端,以及一个大的胞外环。近些年的诸多研究表明,SNMPs在气味鉴别中可能扮演着重要的角色。在昆虫中,SNMP/CD36基因家族被分为主要的三个群体,SNMPs属于群体三,其又被分为两个小的亚群即SNMP1和SNMP2。本文以烟草、辣椒等经济作物上的主要害虫烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guenee)为研究对象,利用分子生物学技术对烟夜蛾感觉神经元膜蛋白(SNMP)基因进行了克隆、原核和组织特异性表达,主要结果如下:(1)根据棉铃虫SNMP基因完整cDNA序列(Genbank accession no.AF462067)设计特异性引物,利用RT-PCR方法对烟夜蛾SNMP基因完整开放阅读框架(ORF)进行扩增、克隆并测序。结果表明:获得的ORF序列与近缘昆虫的序列具有高度的一致性;序列分析结果表明,烟夜蛾SNMP基因ORF全长1572 bp,编码523个氨基酸残基,预测分子量为59.2 kDa,等电点为6.54,该基因暂命名为HassSNMP。序列比对结果表明,烟夜蛾与其他昆虫的SNMP1基因推导表达的氨基酸序列具有较高的一致性,属于SNMP1。根据氨基酸序列建立系统发育树,结果显示,两近缘种烟夜蛾和棉铃虫的SNMP聚在了一起,与其它几种昆虫的SNMP各自分开。此结果在一定程度上说明,昆虫的亲缘关系越近,其氨基酸同源性越高。同源性分析表明,烟夜蛾SNMP基因与其它鳞翅目昆虫的SNMP基因同源性较高,达70%以上,其中与棉铃虫和烟芽夜蛾的同源性达97%和95%。(2)在预测HassSNMP跨膜区时发现,HassSNMP与HarmSNMP一样也具有两个跨膜区而且位置是一样的,这表明HassSNMP具有膜蛋白的典型特征。(3)成功构建了烟夜蛾SNMP基因的原核表达载体,分别导入大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经过IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明,烟夜蛾SNMP基因虽然可在大肠杆菌中转录,但目的蛋白不能正常表达。(4)利用RT-PCR方法,研究了SNMP基因在烟夜蛾不同发育期和不同组织中的表达,结果表明,SNMP在烟夜蛾触角、头(去掉触角)、喙和足中表达,其中在触角中的表达量最高,且在雌雄触角中的表达量差异不显著,在喙中也有较高的表达量,而在胸和腹中没有表达;此外,在成虫、十日龄蛹以及卵中也有该基因的表达,但在卵内的表达量相对较低,在幼虫、一日龄蛹、四日龄蛹和七日龄蛹中没有表达。