高分辨质谱是当今分析化学领域具有广泛应用前景的样品分析技术,具有高灵敏度和高准确性等优点。生物样品中的基质复杂,在进入质谱进行检测之前,必须要经过合适的预处理步骤消除基质干扰,以此提高分析仪器的灵敏度和延长使用寿命等。本文基于在线固相萃取前处理技术与高分辨质谱技术的优势,通过优化实验方案,建立可靠、专一、灵敏、快速的生物样品分析方法,为体内药物浓度监测提供有力的技术支持。首先,本文将U3000与Q Exactive这两种仪器进行联用,组建online-SPE-LC-HRMS系统。首次探讨该联用装置在生物样品分析中的适用性。系统性地比较了目标化合物的二级扫描、目标化合物的一级扫描和一级全扫描三种定量模式对人血浆中的索非布韦的定量能力。通过测试结果的分析和比较可以得出,目标化合物的二级扫描和一级扫描模式对血浆中的索非布韦具有更高的灵敏度,这两种模式的最低定量限均可以达到0.5 ng/m L,同时结果表明高分辨质谱是一种可替代三重四级杆的生物样品分析工具。样品分析时间为10 min。其次,本文在研究测定血浆中单组分的基础上,利用该系统定量分析人血浆中系列抗癫痫药物。采取的定量模式为目标化合物的二级扫描模式。在样品具有较好分离度的前提下,分离顺序依次为拉莫三嗪(内标)、苯巴比妥、卡马西平-10,11-环氧化物(卡马西平的活性代谢物)、苯妥英和卡马西平,即阳离子、阴离子、阳离子、阴离子和阳离子,考查仪器参数对扫描点数的影响:包含列表中特异性离子的起始和终止扫描时间;特异性扫描中的扫描组的时间设置等。整个分析时间为13 min。最终成功将该方法应用于临床样品检测。最后,本文首次将二维液相色谱引入在线固相萃取的设计。通过设计优化建立了一种双在线固相萃取系统,该系统由Oasis~?HLB和HyperSep Hypercarb两个在线固相萃取柱构成,对人血浆和脑脊髓液中物理和化学性质相差极大的两性霉素B、氟康唑和氟胞嘧啶进行同时在线预处理和分析。该方法具有诸多优点:(1)利用两个不同的在线固相萃取柱对生物样品进行在线前处理;(2)依据极性大小,对其采取分别保留的方式,结合中心切割二位液相色谱进行分离;(3)添加双内标获得更好的定量效果。整个分析时间为7 min。这个方法简单、快速并且线性范围合适,最终成功应用于临床监测。