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树突状细胞(Dendritic cells,DCs)作为适应性免疫应答的始动者,其所诱生的CD8+ T细胞应答是机体抗胞内病原微生物感染和抗肿瘤的主要效应细胞。其中,DCs对外源性抗原的交叉提呈是启动CD8+T细胞应答的必要条件,而甘露糖受体(Mannosereceptor,MR)介导的抗原内体转位及内体对p97、Sec61的招募是DCs交叉提呈的关键环节。我们的前期研究发现,微量的尼古丁能通过上调MR表达并进而促进MR介导的抗原内体转位及内体对p97、Sec61的招募。已有文献报道,外源性抗原的负载可促进MR的泛素化并进而可能在抗原内体转位及内体对p97、Sec61的招募中发挥作用。但到目前为止,我们尚不清楚尼古丁刺激对MR泛素化的影响,也不清楚MR泛素化水平及方式在尼古丁促DCs交叉提呈中的作用。为此,本课题以C57BL/6小鼠骨髓体外诱导DCs,以鸡卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)为模式抗原,首先以western blot探究尼古丁上调DCs表面MR表达的机制;再通过免疫共沉淀检测尼古丁对MR泛素化水平及方式的调控作用;以siRNA基因沉默结合泛素突变链掺入技术调控MR泛素化水平及方式,再以激光共聚焦显微镜观察OVA内体定位、内质网相关蛋白p97/Sec61的内体转位及交叉提呈产物SIINFEKL-H2Kb的形成情况;最后通过酶联免疫斑点试验(Enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)检测 IFN-γ 的产生情况反映交叉致敏情况。结果显示:尼古丁能在5～30min明显引起PI3K激酶、蛋白激酶Akt及其下游mTOR和核糖体蛋白激酶p70S6磷酸化激活,且相关激酶抑制剂wortmannin、LY294002、Rapamycin和LY2584702的使用能显著逆转尼古丁对MR的上调作用,提示尼古丁能通过PI3K-Akt-mTOR-p70S6通路上调DCs表面MR的表达;免疫共沉淀结果显示,尼古丁能明显增强MR泛素化水平,并调控MR的K48多聚泛素化方式;激光共聚焦结果显示,MR泛素化水平降低及K48多聚泛素化方式改变能显著减少内吞抗原及抗原交叉提呈产物SIINFEKL-H2Kb与早期内体标志分子EEA1/Rab5共定位,并显著逆转尼古丁增加p97/Sec61与早期内体标志分子EEA1/Rab5共定位、减少p97/Sec61与内质网标志Calnexin共定位的趋势。综上所述,本课题发现了尼古丁调控MR泛素化水平及多聚泛素化方式的规律,并探究了 K48多聚泛素化MR在尼古丁调控外源性抗原内体定位及内质网相关蛋白内体转位中的作用,为进一步阐明尼古丁增强DCs交叉提呈的分子机制打下基础。