蛋白定量是生化研究中最基本的测量,在临床检测与诊断、食品安全、药性分析等领域具有重要意义。基于电喷雾中产生的液滴诱导聚集效应,我们介绍一种高分辨率和高灵敏度的测定蛋白质浓度的绝对定量方法。电喷雾-差分电迁移率-粒子计数分析技术(Electrospray-Differential Mobility Analysis-Condensation Particle Counter,ES-DMA-CPC)是根据不同大小的带电颗粒在电场中迁移率不同,并对获得不同粒径尺寸分布的颗粒进行计数。其具有无需样品预处理、灵敏度高、耗时短、耗样量少、检测范围广等优势。本课题研究内容包括ES-DMA-CPC方法的建立、ES-DMA-CPC仪器装置搭建、ES-DMA-CPC实验参数优化和ES-DMA-CPC绝对定量方法的应用四个部分。该方法的建立和应用不仅满足市场对蛋白质定量表征新技术的需求,而且作为潜在基准方法的研究具有重要的计量意义。本课题具体内容如下:(1)ES-DMA-CPC方法的建立:电喷雾过程中液滴溶剂蒸发后,会引起颗粒的聚集,这种现象我们称之为液滴诱导聚集效应。我们可以通过数学概率统计分析来描述检测到的聚集体和单体之间的关系,并将其应用于溶液中蛋白质绝对浓度的测量。(2)ES-DMA-CPC仪器装置搭建:我们搭建了一套蛋白质浓度绝对定量的仪器装置。外部进样系统选择FLOW-EZ微流体恒流泵来保证液体进样流速的的稳定性和精准度,ES选择3482型电喷雾气溶胶颗粒发生器(TSI,USA),DMA选择3082型差分电迁移率仪(TSI,USA),CPC选择3788型冷凝颗粒计数器(TSI,USA),通过Aim程序进行数据收集。(3)ES-DMA-CPC实验参数优化:通过优化电喷雾-差分电迁移率-粒子计数分析技术(ES-DMA-CPC),包括采用更为常见的二氧化硅毛细管(内径25 μm,长度4.07 cm),系统考察电喷雾电压、液体进样流速以及气体流量对粒子粒径分布的影响,优化蛋白定量分析的条件。结果表明在泰勒锥状态下,样品溶液流速200nL/min、空气流量为1.0L/min,二氧化碳流量为0.1 L/min的条件下,我们可以获得粒径较小分布较窄的单分散颗粒。(4)ES-DMA-CPC绝对定量方法的应用:基于电喷雾中液滴诱导聚集效应,本课题介绍了一种快速,准确的测定蛋白质绝对浓度的测定方法。在这部分内容,我们进行该方法的定量应用,对中国计量院牛血清白蛋白标准物质(BW3627-1),不同浓度的中国计量院牛血清白蛋白标准物质(GBW09515)和人源化IgG1 K单克隆抗体标准物质(RM8671)的浓度进行测量。并且通过方法比较,准确度、精密度和不确定度对数据进行分析,证明了该方法具有准确性和可比性。