【摘 要】
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梅毒作为乙类传染病,一直严重威胁着人类的健康。临床症状的多样性及全身性的器官损伤,严重影响着患者的生存质量。梅毒通过垂直传播胎儿,也会严重影响下一代的健康。因此,早期诊断、及时治疗是有效控制梅毒传染的主要手段。本文分别构建了梅毒螺旋体抗体ELISA检测、化学发光免疫检测、依赖解旋酶的等温核酸扩增检测三种方法,分别对实验条件进行优化,并进行性能评估。实验结果表明:（1）建立的酶联免疫检测方法,阴、阳
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梅毒作为乙类传染病,一直严重威胁着人类的健康。临床症状的多样性及全身性的器官损伤,严重影响着患者的生存质量。梅毒通过垂直传播胎儿,也会严重影响下一代的健康。因此,早期诊断、及时治疗是有效控制梅毒传染的主要手段。本文分别构建了梅毒螺旋体抗体ELISA检测、化学发光免疫检测、依赖解旋酶的等温核酸扩增检测三种方法,分别对实验条件进行优化,并进行性能评估。实验结果表明:（1）建立的酶联免疫检测方法,阴、阳符合率可达到100%,优于梅毒螺旋体抗体国家参考品说明书;最低检出限结果L1、L2为阳性,L3为阴性,L4为阴性,满足国家标准要求;特异性结果显示人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒抗体对检测结果无干扰,批间变异系数为1.88～2.61%,批内变异系数为1.75～2.49%;与市场在售的梅毒螺旋体抗体酶联免疫检测试剂盒进行对比,检测梅毒螺旋体抗体国家参考品100%符合。（2）建立的化学发光免疫检测方法最低检出限结果L1、L2为阳性,L3为阴性,L4为阴性,满足国家标准要求;对含有血红蛋白5 g/L、甘油三酯30 g/L、胆红素0.2 g/L的血清测试,相对偏差在-8.93～4.97%之间,上述物质对检测结果不存在干扰;特异性实验表明与人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒抗体的阳性样本均为阴性,不存在特异性干扰;批内变异系数为4.00～4.71%,批间变异系数为4.29%;应用临床样本,与市售商品阴阳符合率对比,总符合率96.88%,其中不符合的1例,阴性结果与快速血浆反应素环状卡片试验方法学结果一致。（3）建立的解旋酶依赖的等温扩增方法,扩增的产物为50 bp,灰度值为市售结果的1.19倍,扩增效率优于市售试剂盒效果,电泳条带单一,特异性表现良好。本研究结果为梅毒早期诊断提供了免疫学以及分子诊断提供了实验室技术基础。优化了酶联免疫检测方法及梅毒螺旋体抗体化学发光免疫检测方法,并将依赖解旋酶的等温PCR技术应用于梅毒螺旋体病毒的检测,拓宽了分子水平的梅毒螺旋体检测方法。为临床提供快速检测方法,填补原有检测技术的空缺,提供更快速、便捷、灵敏的检测手段。
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