黑木耳(Auricularia heimuer)是我国一种主要的食用菌栽培品种,然而,病害、菌丝体老化和菌种退化等问题严重制约了黑木耳产业的健康。真菌病毒能够侵染食用菌并且可以引起宿主的表型和生理变化,进而发生病害。本研究对黑木耳中是否存在病毒、病毒种类的界定、病毒系统发育关系、病毒对菌丝体表型和生理变化的影响、菌丝体老化对基质降解酶活性的影响进行了初步探索,这为真菌病毒资源的挖掘、病毒病害的防控及菌种培养等方面的研究奠定了基础。本文从不同的黑木耳菌株中提取总RNA,采用基于Illumina Hi Seq平台的宏转录组测序技术获得含有病毒的contigs。根据获得的contigs序列,我们设计了病毒检测引物来确定目标菌株。在菌株CCMJ1271中分离到一个属于Virgaviridae科内未分类病毒的正单链RNA[(+)ssRNA]病毒,命名为Auricularia heimuer mycovirgavirus 1(Ah MV1)。其基因组全长9,934 bp,含有一个poly(A)尾巴,编码一个大的和两个小的开放阅读框,ORF1编码RNA依赖性RNA聚合酶(Rd Rp);ORF2编码类似于植物病毒的运动蛋白(MP);ORF3编码外壳蛋白(CP)。由于该科内所含真菌病毒具有独特的Poly(A)结构以及在真菌病毒中少有的假定运动蛋白结构,建议在Virgaviridae科中建立一个新属Mycovirgavirus来容纳Ah MV1以及与它有相近结构的病毒。该病毒已在Gen Bank登录注册(登录号为MN928963)。在菌株CCMJ1296中分离得到一个基因组全长为7,127 bp的正单链RNA病毒,该病毒为Fusariviridae科内的新成员,命名为Auricularia heimuer Fusarivirus 1(Ah FV1)。根据基因组结构分析表明,该病毒含有2个部分重叠的ORFs,3’端含有poly(A)结构,其中ORF1含有Rd Rp和病毒解旋酶(Hel)保守区域,ORF2编码功能未知。此外,建议将目前公认的镰刀菌病毒根据其序列长度和基因组结构至少细分为两个其他属。该病毒已在Gen Bank登录注册(登录号为MT232758)。在菌株CCMJ1222中分离得到一个单股负义链RNA病毒,命名为Auricularia heimuer negative-stranded RNA virus 1(Ah Ns RV1)。该病毒为Mymonaviridae科内的新成员,其基因组全长为11,441 bp,含有6个无重叠的ORFs,各个ORF之间的间隔区高度保守,与单股负义链RNA病毒的特性一致。由于该科内所含病毒较少,目前未进行详细的分属,随着负链RNA病毒的陆续被报道,建议根据序列长度和基因组结构特性将当前已经发表的负链病毒细分为至少2～3个新的属。该病毒已在Gen Bank登录注册(登录号为MT259204)。对3株感染病毒的菌株和1株未检测到病毒的菌株不同时期的菌丝生长情况进行了观察,结果显示生长初期各菌株菌丝浓密且长势较好;随着培养时间的增加,气生菌丝逐渐减少,且贴附培养基生长。感染病毒的菌株黑色素随着菌丝体菌龄的增加,分泌量先增加后减少,而未检测到病毒的菌株未见明显的黑色素分泌。感染病毒的菌株漆酶和酸性木聚糖酶活性随菌丝体老化而降低,但与未检测到病毒的菌株差异不显著;感染病毒的菌株和未检测到病毒的菌株纤维素酶活性呈现先下降后上升的趋势。结果表明,黑木耳老化菌丝体分泌的黑色素可能与感染该菌株的病毒有关。但病毒的存在对老化后基质降解酶的变化没有明显影响,因此,这一现象的具体机制有待进一步探讨。