论文部分内容阅读
研究背景:原发性肝癌是一种典型的炎症相关性肿瘤,多继发于慢性肝炎和肝硬化,其肿瘤微环境中存在大量的免疫细胞。调节性T细胞(Regulatory T Cell,Treg)作为CD4+T细胞的一个重要表型,发挥着免疫调节作用,可通过抑制具有肿瘤细胞杀伤功能的CD4+T细胞、CD8+T细胞和自然杀伤细胞(natural killer cell,NK cell)等效应细胞的功能,促进肝癌的发生和发展。CD39和CD73为Treg细胞膜上表达的两种腺苷代谢分子,二者协同作用可水解三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)产生苷,从而发挥免疫抑制作用。本文主要研究原发性肝癌患者外周血中的Treg和CD39、CD73阳性亚群比例的变化及其临床意义。研究目的:通过检测原发性肝癌患者外周血中Treg和CD39、CD73阳性亚群的比例,分析其比例的变化与肝癌临床进展的关系,同时观察Treg和CD39、CD73阳性亚群的比例变化与肝癌患者肝损伤的相关性,从而为原发性肝癌的诊断治疗提供新思路。研究方法:1.按照纳入与排除标准,收集2017年12月至2019年3月期间入住江苏省苏北人民医院肝胆胰中心,并经临床和/或病理诊断为原发性肝癌患者80例作为研究组,并按照原发性肝癌的分期标准分为Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ组两组,分别有患者36和44例。同时检测患者的丙氨酸转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)指标,并按 ALT≥80 IU/L标准(两倍正常值)分为肝损伤组和无肝损伤组,分别有患者51和29例。同时选取“健康”志愿者76例作为对照组,并采集外周血样。2.采用流式细胞术分别检测两组人群外周血中Treg、CD39和CD73阳性亚群的比例,比较研究组和对照组患者血中这类细胞比例的差异,同时对研究组Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期组患者血中的这类细胞比例进一步进行分析,并比较肝损伤组和无肝损伤组患者血中这类细胞比例的不同。3.对研究组Treg及其CD39、CD73阳性亚群的比例与ALT和AST肝损伤指标变化关系进行相关性研究研究结果:1.研究组的原发性肝癌患者与对照组中“健康”志愿者,Ⅰ-Ⅱ期组患者与Ⅲ-Ⅳ期组患者,肝损伤组患者与无肝损伤组患者在性别、年龄、病因、家族史等方面均无统计学差异(P>0.05)。2.研究组与对照组Treg及其CD39、CD73阳性亚群比较:原发性肝癌患者(研究组)外周血中Treg占CD4+T细胞比例(%)明显高于对照组:(9.57±3.40)VS(5.73±2.03),差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,也发现研究组血中 CD39+Treg(18.02±9.89)和 CD73+Treg(15.59±5.87)占 Treg的比例明显高于对照组(13.49±2.16和13.46±6.67),差异亦具有统计学意义(P<0.05)。虽然,研究组血中CD39+CD73+Treg占Treg的比例高于对照组:(4.95±1.17)VS(4.88±1.23),但是,组间经统计学分析,差异无统计学意义(P>0.05)。3.不同肝癌分期组Treg及其CD39、CD73阳性亚群比较:Ⅲ-Ⅳ期患者血中Treg 占CD4+T细胞的比例(%)明显高于Ⅰ-Ⅱ期组:(10.52±3.42)VS(8.40±3.03),差异具有统计学意义(P<0.05),对 CD39+Treg分析也发现其比例在Ⅲ-Ⅳ期患者中也明显高于Ⅰ-Ⅱ期组:(20.01±9.84)VS(15.57±9.51),差异具有统计学意义(P<0.05)。然而,对CD73+Treg研究发现两组比较其比例无统计学差异(P>0.05),结果分别为15.45±5.99和15.76±5.80。进一步对CD39+CD73+Treg 比较分析也发现与CD73+Treg类似的结果,其值分别为 5.01±1.08 和 4.89±1.24(P>0.05)。4.肝损伤组与无肝损伤组Treg及其CD39、CD73阳性亚群比较:肝损伤组患者外周血中Treg占CD4+T细胞的比例(%)明显高于无肝损伤组:(10.27±3.41)VS(8.31±3.06),差异具有统计学意义(P<0.05),同时发现肝损伤组血中 CD39+Treg(19.86±10.58)和 CD73+Treg(16.61±6.15)占 Treg 的比例也高于无肝损伤组(14.77±7.67和13.73±5.07),经统计分析,差异具有统计学意义(P<0.05),而且对CD39+CD73+Treg占Treg的比例分析发现,虽然肝损伤组(5.09±1.09)高于无肝损伤组(4.68±1.27),但组间差异无统计学意义(P>0.05)。对ALT和AST与Treg的比例分别进行相关性分析,发现均呈正相关,相关系数(r)分别为0.578和0.581,P<0.05;对ALT与CD39+Treg的比例分析亦发现呈正相关关系(r=0.556,P<0.05),AST与CD39+Treg的比例亦呈正相关,其相关系数为0.609,P<0.05。ALT、AST与CD73+Treg的比例虽然均呈正相关,但与上述相关系数比较,其相关性相对较弱,其值分别为0.279和0.342,P<0.05。研究结论:1.由研究组患者外周血中Treg占CD4+T细胞的比例高于对照组可以认为,该细胞可能具有促进原发性肝癌发生和发展的作用。2.将CD39+Treg和CD73+Treg的比例在研究组和对照组间所出现的差别与其在肿瘤不同分期进行综合分析,可以有理由推测,在原发性肝癌的免疫微环境中,CD39和CD73分子均有促进Treg发挥免疫抑制作用,但是,CD39的这种抑制效应可能较强。3.通过分析原发性肝癌肝损伤组和无肝损伤组的Treg、CD39+Treg和CD73+Treg的比例以及其与ALT和AST呈正相关的结果,可以认为Treg及其CD39、CD73阳性亚群可能具有促进肿瘤对肝癌组织的侵袭与压迫作用,从而造成肝损伤。