母源RNA fingers在爪蟾早期胚胎发育中的功能研究

来源 :中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vangor
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一些动物(如果蝇、线虫、斑马鱼和爪蟾)的生殖系细胞命运很大程度上是由存在于细胞质中的特殊结构——原生殖质中的母源因子决定的。形成于卵母细胞中的原生殖质是由高密度颗粒,线粒体和一些特异定位于其中的RNA等组成的无膜结构。在早期胚胎中,只有一部分细胞继承原生殖质。这些细胞将会特化形成原生殖细胞(PGC),即精子和卵子的前体细胞。一般认为原生殖质中的RNA编码原生殖细胞特化和迁移过程的调控因子,但这些RNA在原生殖细胞形成过程中的具体功能还有很多不清楚的地方。本论文研究一个新发现的定位于爪蟾卵母细胞植物极皮质顶端的RNA fingers,RNA原位杂交显示fingers mRNA在早期胚胎中可能与原生殖质共定位。fingers mRNA可能编码一个包含21个连续C2H2型的锌指结构域的蛋白。体外实验结果显示Fingers蛋白能够结合单链polyG人工RNA多聚物,提示它可能是个RNA结合蛋白。绿色荧光蛋白标记的Fingers蛋白在COS-7细胞核内呈点状分布,并与剪切体组分共定位。HEK293细胞中的免疫共沉淀实验结果进一步显示Fingers蛋白能够结合剪切体组分蛋白U2AF35,提示它可能在RNA剪切过程中起作用。我们制备了识别Fingers蛋白氮末端独特序列的亲和纯化的兔多克隆抗体,但是检测不到卵母细胞和早期胚胎中内源的Fingers蛋白,显示内源Fingers表达水平很低。进一步发现fingers mRNA在卵母细胞里的翻译被其5非翻译区(UTR)的上游读框显著抑制,这可能是导致Fingers低水平表达的主要原因之一。与此相对应,在胚胎里过量表达Fingers蛋白导致细胞死亡,推测可能是由于外源Fingers蛋白干扰了剪切体功能。此外发现利用morpholino抑制早期胚胎中fingers mRNA的翻译对PGC形成过程没有影响。进一步的研究发现在卵母细胞里利用反义寡核苷酸降解fingers mRNA导致已知的原生殖质标记RNA Xpat从植物极皮质释放到深层细胞质中,这种表型可以通过注射体外转录的fingers mRNA来挽救,显示fingers RNA可能参与维持原生殖质结构的稳定。综合这些结果,我们认为fingers mRNA可能在原生殖质组装过程中有重要作用。Fingers蛋白在早期胚胎发育过程中的其它功能还有待进一步确定。
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