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实验目的： 1、通过建立以鸡卵清蛋白(OVA)诱导的小鼠哮喘模型，探究胡黄连素硝酮(AN-1)及其母体化合物胡黄连素(Apo)的治疗哮喘的抗炎抗氧化作用双重作用。 2、本研究还将尝试研究胡黄连素硝酮(AN-1)对气管平滑肌是否具有舒张作用。 3、本课题对AN-1的安全性进行了初步的评价，以初步证实其成药性，为开发更为有效安全的治疗哮喘的新药奠定工作基础。 实验方法： 1、抗炎抗氧化研究 建立以OVA诱导激发Balb/c小鼠的哮喘模型，在激发前一小时用AN-1和Apo进行药物预保护。在实验期间，对动物进行整体观察；取肺泡灌洗液(BALF)进行炎细胞计数并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测灌洗液的肿瘤坏死因子α(TNF-α)，白介素-4(IL-4)，白介素-13(IL-13)的含量；取肺组织进行湿干比计算，计算肺通透指数LPI，进行抗氧化指标-谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的测定；取肺组织进行HE染色，观察肺组织和气管的病理改变。 2、舒张气管平滑肌活性研究 在离体气管模型中，测试药物对乙酰胆碱(Ach)和OVA致正常离体气管的收缩作用，同时制备哮喘模型的气管样品，测试药物对模型气管的改善作用。 3、安全性评价 我们对AN-1进行了急性毒性和亚急性毒性实验，分别考察AN-1的急性毒性和亚急性的毒性，对其安全性和成药性进行评价。 实验结果： 1、与哮喘模型组相比，AN-1各剂量组(21.5mg/kg，43mg/kg和86mg/kg)小鼠哮喘症状均不同程度有改善，BALF炎细胞和细胞因子水平降低，肺湿干比、肺通透指数减少，肺组织抗氧化能力回升，光镜下炎细胞数量减少、粘膜水肿减轻、肺泡和上皮结构恢复。中高剂量组(43mg/kg和86mg/kg)在各项抗炎、抗氧化效果比母体Apo要好。 2、Ach引起正常小鼠气管收缩张力3.163g，0.01mol/L的AN-1降低至3.098g，无显著性差异；OVA引起正常小鼠气管收缩张力为3.150g，0.01mol/L的AN-1降低至3.056g(P<0.05)，说明AN-1对正常大鼠支气管收缩张力影响不大。然而，AN-1对模型大鼠支气管收缩张力影响却比较明显。OVA引起致敏小鼠气管收缩张力为3.31g，10mmol/L的AN-1降低至2.43g(P<0.001)，Apo降低至2.75g(P<0.001)。 3、急性毒性实验结果没有测出 LD50值，口服最大耐受量大于3g/kg，动物没有出现明显毒性表现；亚急性毒性实验结果显示高剂量组(125mg/kg)的动物没有出现明显毒性反应。 结论： 1、本课题初步证明AN-1具有一定的治疗哮喘作用，具有抗炎、抗氧化双重活性；可喜的是AN-1可能同时具有舒张平滑肌活性。 2、AN-1具有较好的安全性，与apocynin相比，急性毒性口服MTD大于3000mg/kg，亚急性毒性中，125mg/kg经30天连续给药安全性良好。 本课题组前期在药学研究过程中证明AN-1合成工艺不复杂，质量可控。因此，AN-1具有很好的成药性，而且可能是一个潜在的治疗哮喘的药物。