目的:龙蛭汤可有效改善缺血性脑卒中患者的神经功能和临床症状,前期研究表明其对缺血性脑损伤大鼠神经元有保护作用,但其对神经元的保护作用机制尚未明确。通过过氧化氢（H2O2）诱导神经母细胞瘤（SH-SY5Y）氧化损伤,研究龙蛭汤含药血清对受损的SH-SY5Y的保护作用,进一步探讨龙蛭汤含药血清对神经元保护作用可能的机制。方法:依据中药血清药理学和药物代谢动力学方法制备龙蛭汤含药血清（LZD）和丁苯酞含药血清（NBP）,应用自噬抑制剂氯喹（Chloroquine,CQ）、自噬诱导剂雷帕霉素（Rapamycin,RAP）干预体外构建的H2O2诱导的SH-SY5Y氧化损伤模型。将SH-SY5Y细胞株进行培养、传代,取处于生长对数期的SH-SY5Y与含药血清及有关药物共孵。采用CCK-8法检测不同浓度（梯度分别为0umol/L、100umol/L、200umol/L、400umol/L、800umol/L、1600umol/L）H2O2处理2h、4h、8h、12h、24h后对SH-SY5Y增殖的影响,选择最佳作用浓度及合适作用时间。分组设置:1.正常对照组（Control组）;2.空白血清组（BS组）;3.模型组（H2O2组）;4.龙蛭汤含药血清组（LZD组）;5.丁苯酞含药血清组（NBP组）;6.CQ+H2O2组（CQ组）;7.CQ+H2O2+LZD组（CQ+LZD组）;8.RAP+H2O2组（RAP组）;9.RAP+H2O2+LZD组（RAP+LZD组）。通过光学显微镜观察细胞形态学变化;CCK-8检测各组SH-SY5Y增殖能力;透射电子显微镜观察细胞的自噬体和超微结构;采用免疫印迹法比较各组Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平;q RT-PCR比较各组Beclin1、LC3的m RNA表达水平。阐释龙蛭汤含药血清通过调控自噬对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的氧化损伤的保护作用机制。结果:（1）当H2O2浓度在400umol/L时,对SH-SY5Y的细胞活性有显著抑制作用,处理4h时,细胞活力下降50%左右可通过一定条件逆转细胞状态,因此后续实验采用400umol/L浓度的H2O2处理4h。（2）与Control组、BS组比较,H2O2组细胞形态发生较大改变,细胞已经己经明显受到抑制,细胞突触大部分消失,细胞圆缩,出现聚集倾向,少数细胞尚有清晰的突触,呈片平棱形或星形。（3）与H2O2组比较,LZD组细胞存活率显著提高,可降低H2O2造成的细胞损害,维持细胞形态。较NBP组,龙蛭汤具有更高增殖能力。（4）LZD组细胞胞质内双层膜样结构增多,弯曲延展,包裹部分线粒体,而H2O2组细胞胞质内双层膜样结构和空泡数量相对较低,Control组与BS组细胞可见少量双层膜结构,但结构不明显,无明显变化。（5）与H2O2组比较,LZD组Beclin1、LC3 m RNA表达增强,Beclin1蛋白表达及LC3-II/LC3-I比值升高。（6）与H2O2组比较,CQ组细胞活力增强,RAP组细胞活力下降;与CQ组比较,CQ+LZD组细胞活力上升;与RAP组比较,RAP+LZD组细胞活力升高。（7）龙蛭汤含药血清协同CQ、RAP干预SH-SY5Y细胞,与CQ组相比,加入龙蛭汤后CQ+LZD组Beclin1、LC3 m RNA表达水平显著升高;与RAP组相比,RAP+LZD组的Beclin1、LC3m RNA表达水平降低。其LC3Ⅱ/Ⅰ的比值及Beclin1的蛋白含量趋势与m RNA一致。结论:龙蛭汤含药血清通过调控细胞自噬水平促进SH-SY5Y细胞增殖,减轻H2O2引起的细胞氧化损伤,维持细胞完整、减轻细胞老化,对神经元细胞有重要的保护作用。