补肺益肾解毒法中药方对Lewis肺癌小鼠Foxp3和miRNA-155影响的实验研究

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目的:研究补肺益肾解毒法中药方对Lewis肺癌小鼠Foxp3及miRNA-155表达水平的影响,揭示补肺益肾解毒法中药方抗肺癌的免疫与分子机制,为临床抗肺癌提供更确切的实验依据,以期寻找潜在的治疗靶点。  方法:  (1)用Lewis肺癌细胞,构建小鼠腋下移植瘤模型。近交系C57BL/6雄性小鼠,共40只,按照完全随机设计,共分为5组:空白对照组、模型对照组、中药组、化疗组和综合组,各处理组予相应的药物干预,观察各组小鼠的一般情况及行为体征,记录并计算体质量、饲料消耗。造模第15天脱椎处死各组小鼠,无菌取肺脏、脾脏、胸腺和移植瘤,称重并计算去瘤体重、抑瘤率、和脏器指数,研究补肺益肾解毒法中药方对荷瘤小鼠生存质量的影响;RT-PCR方法评价补肺益肾解毒法中药方对各组小鼠胸腺及荷瘤小鼠移植瘤中Foxp3mRNA表达水平的影响;Western Blot检测补肺益肾解毒法中药方对Lewis肺癌小鼠移植瘤Foxp3蛋白的表达水平;Real-Time PCR检测补肺益肾解毒方中药方对Lewis肺癌小鼠miRNA-155表达水平的影响。  (2)同上法构建动物模型,近交系C57BL/6雄性小鼠,共24只,按照完全随机设计分组,分别为模型组、中药组、抑制剂组和联合用药组,应用PCR、WesternBlot等检测方法,研究补肺益肾解毒法中药方对肺癌小鼠Foxp3和miRNA-155表达的影响。  结果:  (1)观察各组小鼠生存质量和肿瘤生长情况,结果提示:中药组小鼠饲料消耗量仅低于正常对照组,活动度未见明显降低。与模型对照组相比,中药组小鼠的移植瘤体积减小,去瘤体重增加,脾脏指数和胸腺指数升高,有统计学意义(P<0.01),中药组小鼠的生活质量较模型组明显改善;与化疗组相比,综合治疗组瘤重减少,去瘤体质量增加,脾脏指数和胸腺指数升高,有统计学意义(P<0.01),综合治疗组小鼠的生活质量较化疗组明显改善。  (2) RT-PCR结果表明:与模型对照组小鼠相比,中药能显著降低Lewis肺癌小鼠胸腺和移植瘤组织中Foxp3表达水平,差异有统计学意义(P<0.01);且中药与DDP合用,下调Foxp3mRNA表达的效果优于DDP单药(P<0.01)。同时,中药联合miRNA-155抑制剂给药,小鼠移植瘤中的Foxp3 mRNA的表达最低,有统计学意义(P<0.01)。  (3) Western Blot结果显示:与模型组比较,中药组小鼠移植瘤中Foxp3蛋白的表达水平显著下调,有统计学意义(P<0.01);且与DDP合用,移植瘤中Foxp3蛋白表达低于化疗组,差异有统计学意义(P<0.01)。同时,中药联合miRNA-155抑制剂能显著下调小鼠移植瘤中Foxp3蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.01)  (4) Real-Time PCR结果显示:化疗组小鼠移植瘤中miRNA-155表达反而上升,且拮抗中药对miRNA-155的抑制作用,差异有统计意义(P<0.05);中药能下调移植瘤中miRNA-155,且与miRNA-155抑制剂有协同增效作用,有统计学意义(P<0.01)  结论:补肺益肾解毒法中药方,通过抑制皮下移植瘤生长,改善荷瘤小鼠一般情况和饲料消耗,减轻化疗药物的毒副反应,提高Lewis肺癌小鼠的生存质量;同时,补肺益肾解毒法中药方可以增加肺癌小鼠的脾脏指数和胸腺指数,同时下调Foxp3的表达,降低miRNA-155的表达水平。补肺益肾解毒法中药方抗肺癌的作用机制,可能是通过刺激免疫防御,下调Foxp3和miRNA-155的表达水平,改善肿瘤免疫逃逸,双向调控机体免疫机能,从而发挥扶正抗癌的作用。
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