绿豆皮黄酮提取纯化及不同储藏条件下黄酮的特性变化

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:titanium2002
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黄酮类化合物是自然界普遍存在的一类天然产物,又称黄酮体或黄碱素。黄酮是绿豆的主要代谢产物之一,具有抗氧化、消炎和降糖等丰富的生物活性功能。而黄酮类化合物又具有储藏性能较差,易氧化降解等特性,因此探究绿豆气调的储藏,减少其活性成分损失就显得尤为重要。本研究以明绿豆和绿丰5号绿豆为原料制备黄酮提取液,采用超声微波协同萃取技术制备黄酮提取物,采用AB-8大孔吸附树脂对粗提物进行纯化,使用FTIR红外光谱和扫描电镜对纯化前后的化合进行分析,并用高分辨率质谱和超高效液相色谱定性和定量分析各储藏条件下黄酮化合物,最后通过体外抗氧化试验研究了明绿豆和绿丰5号绿豆在不同储藏条件下黄酮的活性变化。具体研究结果如下:(1)采用超声-微波萃取各储藏条件下绿豆皮中总黄酮,通过单因素试验探讨乙醇浓度、料液比、温度等各方面因素和总黄酮提取率之间的关系,通过响应面法找到超声-微波协同萃取法的最佳工艺条件是:乙醇浓度61%、液固比31.4 mL/g、时间25.8 min、微波功率521 W,该条件下黄酮提取率达为6.867%。(2)通过正交实验分析得到AB-8大孔吸附树脂动态吸附最优条件是:样液质量浓度为1mg/mL,最佳流速为2 mL/min,最佳pH为5,最佳径高比为1:15,此时树脂动态吸附量达到最大值为24.38 mg/g,并通过单因素筛选出最佳洗脱剂体积分数为95%,用量为175mL。较优化纯度前提高44.03%。(3)通过高分倍率质谱分析了纯化物黄酮各组分,牡荆素和异牡荆素为黄酮主要组分,故选择牡荆素和异牡荆素做后续黄酮含量研究。利用超高液相色谱进一步分析证明了绿豆皮中主要存在2种黄酮类化合物,即牡荆素和异牡荆素,并定量分析了各储藏条件下黄酮含量变化,通过与平行对照组比较黄酮储藏期间的稳定性。相同温度下,真空储藏黄酮效果最佳。其中常温下在CO2气氛下比在N2+CO2混合及N2气氛下效果好,低温4℃时,CO2气氛下比N2及N2+CO2混合气氛下效果较好。采用N2、N2+CO2混合、CO2及真空包装能有效隔绝绿豆与外界氧气接触,抑制其有氧呼吸,减少相关酶反应进程,使绿豆处于休眠及半休眠状态。无论常温下、还是低温4℃下储藏均以真空包装对绿豆中黄酮类化合物的有效成分保存效果最佳。(4)通过羟基自由基、DPPH清除能力、脂质过氧化、NO2-清除能力的体外抗氧化试验比较,绿丰5号绿豆黄酮的纯化物抗氧化能力高于明绿豆,这是因为绿丰5号绿豆较明绿豆黄酮含量较高。各储藏条件下清除能力强弱为:真空>二氧化碳>氮气加二氧化碳≈氮气;低温优于常温,氮气和氮气加二氧化碳储藏条件下黄酮活性相近,低温下该现象更为显著。因此,本研究得到的不同储藏条件下黄酮含量、活性变化规律和储藏后绿豆黄酮的分析方法,为绿豆精细化储藏和绿豆黄酮组分结构研究提供了一种新思路。
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